纳米银海水环境行为及其对海洋细菌的毒性效应与机制研究

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纳米银(AgNPs)的应用非常广泛,且具有很强的生物毒性和杀菌性,目前已经在河口及近岸海域检测到AgNPs的存在,但是AgNPs进入近岸海域的环境行为以及对海洋细菌造成的影响尚缺乏研究。从河口至近岸海域具有盐度递增及较高浓度溶解有机物(dissolved organic matter,DOM)这两个典型特征。为了研究AgNPs在海水中的环境行为,本文对相同包裹物(citrate)不同粒径(10 nm和40 nm)的AgNPs和相同粒径(40 nm)下不同包裹物(citrate和bPEI)的AgNPs,在不同盐度及不同DOM浓度人工海水中的稳定性进行研究。进一步的,在AgNPs海水环境行为的基础上,探索了AggNPs海水环境行为与其对典型海洋细菌玫瑰杆菌(Roseobacter denitrificans ochl 14)和弧菌(VIbrio caribbeanicus JL3219)毒性的关联。最后,研究AgNPs对玫瑰杆菌(Roseobacter denitrificans och 114)、弧菌(Vibrio caribbeanicus JL3219及Vibrio sp.JL3833)、交替单胞菌(Alteromonas macleodii ATCC271 26)和海杆菌(Marinobater algicola JL117)的生长抑制差异以及抑制机理,结果表明:1.在盐度为5至35的人工海水中,与盐度为0的相比,AgNPs都发生了团聚,相同包裹物(citrate)的不同粒径AgNPs在各盐度海水中形成约100 μm的团块,团块大小无显著差异。当AgNPs包裹物不同时,包裹物为citrate的AgNPs(Ag-Cit)形成的团块比包裹物为bPEI(Ag-bPEI)的大2至40倍。表明,AgNPs在所有盐度海水中会发生团聚行为,形成的团块大小与海水的盐度及AgNPs的粒径无明显相关性,而与AgNPs的包裹物具有显著相关性。2.在海水中存在DOM条件下,Ag-Cit形成的团块反而比Ag-bPEI的小5至15倍,DOM增强了包裹物为citrate的AgNPs稳定性,而降低了包裹物为bPEI的AgNPs稳定性,并且DOM浓度越高,Ag-bPEI的稳定性越差。说明,DOM是影响AgNPs稳定性的重要因素,也进一步说明AgNPs的包裹物是影响其在海水中稳定性的关键因素。3.在纯海水中,Ag-Cit形成的团块显著大于Ag-bPEI,相应的Ag-Cit对och114和JL3219的抑制率显著弱于Ag-bPEI(P<0.05)。在高浓度DOM海水中,Ag-Cit形成的团块显著小于Ag-bPEI,相应的Ag-Cit对och114和JL3219的抑制率显著强于Ag-bPEI(P<0.05)。AgNPs在不同盐度纯海水中的稳定性无明显差异,其对och114和JL3219的抑制率也没有显著差异(P>0.05)。说明,海水环境中不同条件下AgNPs对细菌的毒性与AgNPs的稳定性(团聚程度)具有相关性,使AgNPs团聚形成的团块更大的条件下,其对细菌的毒性更弱,反之则更强。4.AgNPs对5株海洋细菌的毒性由大到小依次为och114、JL117、JL3219、JL3833和ATCC27126,och114和JL117为敏感种。通过研究Ag-Cit10对敏感种och114产生毒性的机理表明,AgNPs能明显增大och114细胞外膜和内膜的通透性,ochl 14细胞内累积的活性氧(ROS)随AgNPs浓度的升高而升高,浓度为1 mg/L的AgNPs刺激och114细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性明显升高。由此说明,AgNPs对och114存在物理和生理损伤,AgNPs能对细菌的细胞膜造成破坏,并且能刺激细菌胞内的ROS水平升高,并引起与氧化水平相关SOD酶的活性变化。
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