黑种草子提取与精制工艺研究

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ssddhwl
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目的:确定黑种草子提取物的最佳提取和纯化工艺,并对其总皂苷和总黄酮的含量测定方法进行考察,为其开发为天然植物饲料原料及植物提取物饲料添加剂的临床研究提供依据。方法:本试验采用L9(34)正交试验法,通过考察乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和次数,以总皂苷和总黄酮含量为工艺选择的质控指标,确定黑种草子的最佳提取工艺;以黑种草子粗提物为原料,以总皂苷和总黄酮的吸附率和解析率为指标,通过单因素试验考察AB-8型大孔树脂对总皂苷和总黄酮吸附的影响因素(上样浓度、pH、上样量和上样流速)、解析的影响因素(洗脱剂体积分数、用量和洗脱流速);在单因素试验的基础上,以总皂苷和总黄酮得率作为测评指标,以上样液pH、洗脱剂体积分数和洗脱流速为考察因素,通过正交设计优化黑种草子粗提物的纯化工艺;采用HPLC测定纯化前后黑种草子提取物中常春藤皂苷元单体含量;通过线性关系考察、精密度、稳定性、重复性以及加样回收率试验对总皂苷和总黄酮的含量测定方法考察。结果:1、确定黑种草子提取物的最优提取工艺条件为:以60%的乙醇溶液与药材重量比8:1的比例进行水浴回流提取2次,每次1h;在此条件下进行验证试验,黑种草子总皂苷提取量为 49.39mg·g-1(RSD=1.93%),总黄酮提取量为 2.29 mg·g-1(RSD=1.27%)。2、确定黑种草子提取物的最佳纯化工艺条件为:pH 5.2、浓度为0.04 g/mL的90 mL的粗提物溶液以2BV·h-1的流速上样,以5BV70%的乙醇3BV·h-1的流速进行洗脱;在此条件下进行验证试验,黑种草子总皂苷纯度从纯化前的30.51%提高到了 65.77%(RSD=1.56%);总黄酮纯度从纯化前1.42%提高到了 3.23%(RSD=2.66%)。黑总草子提取物中常春藤皂苷元含量由纯化前的43.70 mg·g-1提高到了 144.47mg·g-1。3、黑种草子总皂苷方法学考察结果显示常春藤皂苷元含量在0.04 mg~0.24 mg(R2=0.9991)之间与吸光值线性关系良好;精密度、重复性和稳定性试验的RSD分别为0.83%、1.31%、1.07%;平均加样回收率为 99.60%,RSD 值为 1.43%(n=6)。4、黑种草子总黄酮方法学考察结果显示芦丁含量在0.025 mg~0.240 mg(R2=0.9997)之间与吸光值线性关系良好;精密度、重复性和稳定性试验的RSD分别为1.02%、2.27%、2.29%;平均加样回收率为93.47%,RSD值为1.04%(n=6)。结论:本研究建立了黑种草子提取物的最佳提取和纯化工艺,经优化后的工艺稳定可行,可用于黑种草子提取物的制备;对黑种草子总皂苷和总黄酮的含量测定方法进行了考察,该方法适应性良好,具有可行性。本试验为后续黑种草子提取物的临床试验奠定基础,为其开发为天然植物饲料原料及植物提取物饲料添加剂的临床研究提供依据。
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