目前胰高血糖素样肽1(Glucagon-Like Peptide-1,GLP-1)受体激动剂的细胞筛选技术多是通过检测激活后细胞内环磷酸腺苷(cAMP)水平变化来筛选,由于引起cAMP水平变化的因素较多,特异性并不理想。因此,建立高效、灵敏的高通量药物筛选模型意义十分重大,本研究将对已建立的能稳定表达绿色荧光蛋白标记GLP-1R/U-2 OS细胞株进行规模化培养条件的优化,达到快速、稳定和低成本、高质量的细胞规模化生产目的,以适应高通量筛选的要求。论文首先对细胞接种密度进行了优化,采用96孔培养板中,用含10%胎牛血清的DMEM培养基(100μl/孔),以0.2×106 cells/ml的接种密度可在48h让细胞增殖达到80%以上汇合度,而0.5×106 cells/ml时仅仅需要24h就可达到80%以上的汇合度,且细胞生长状态良好,可立即用于后续的研究和实验。论文还研究了不同G418浓度下细胞的状态,研究表明不同浓度的G418在培养时间相同时对细胞的增殖数量、荧光细胞的占比影响不显著；随培养时间的推移,荧光细胞所占比例有逐渐增加的趋势,不同浓度的G418最后均可使荧光细胞占比提高到50%以上。血清优化实验显示：在同一细胞接种密度下,类胎牛血清体积比对细胞增殖影响不显著；而采用胎牛血清,其体积比的不同对细胞的生长有显著影响,且血清体积比为20%时,细胞增殖数目最多；因此规模化培养应采用胎牛血清;随后还对葡萄糖的起始浓度和谷氨酰胺添加浓度进行了单因素的显著性分析,结果显示葡糖糖的起始浓度对细胞生长影响显著,而谷氨酰胺的添加浓度对细胞的生长影响不显著。论文最后通过正交设计研究了血清、葡萄糖、谷氨酰胺浓度三个影响因子对细胞生长的影响,结果显示血清浓度是影响细胞生长的显著因子,而葡萄糖和谷氨酰胺浓度仅是次要因子,研究得到的最佳培养基参数为：葡萄糖、胎牛血清和谷氨酰胺的浓度分别为3.5g/L、20%和2mM；接种密度为1×104cells/孔。采用优化的培养基培养,GLP-1R/U-2 OS细胞株可在培养24小时后汇合度达到80%,且状态良好。最后对培养的细胞进行了功能验证,在加入阳性对照物Exendin-4后在能观察到显著的受体配体结合反应,并符合量效关系曲线。经成本测算,生产一块可供实验用的96孔板细胞总成本在十几块钱,而且不需要添加G418。本论文从接种密度、血清类型与浓度、G418筛选浓度、起始葡萄糖、谷氨酰胺的浓度等方面对细胞系进行了培养优化,并通过正交实验对血清、葡萄糖及谷氨酰胺添加浓度三个影响因子进行了分析,得到了最佳培养条件,为GLP-1R/U-2 OS细胞株的规模化培养奠定了基础。