HPD介导的光动力疗法对肺癌细胞的杀伤效应及凋亡的研究

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目的:血卟啉衍生物介导的光动力疗法(HPD-PDT)对肺腺癌A549肿瘤细胞的杀伤效应及其凋亡的研究。方法:将培养的肺癌A549细胞分别与不同浓度血卟啉衍生物(Hematoporphyrin Derivative,HPD)5、10、12、15、20μg/ml孵育4h后,给予不同功率密度强度的激光(25、50、75、100mw/cm~2)进行照射,同时设立单纯光敏剂组(仅给予血卟啉衍生物孵育,无不同强度的激光照射);单纯激光照射组(仅给予不同强度的激光照射,无光敏剂孵育)及空白对照组(既无光敏剂孵育,也无不同强度激光照射)。CCK8法检测细胞存活率,筛选最佳光照强度及光敏剂浓度,进行后续实验;根据CCK8实验结果,分组后通过Hoechst 33258染色,荧光显微镜下检测肺癌A549细胞的凋亡情况;AnnexinV-FITC/PI双染法检测肿瘤细胞凋亡;RT-PCR检测Bcl-2、Survivin、caspase-3、Bax的mRNA表达水平。结果:单独给予不同浓度的光敏剂孵育或不同功率密度的激光照射对肺癌A549细胞无明显杀伤作用,二者联合时随光敏剂浓度及激光功率密度的增高杀伤效应明显。CCK8结果显示:15μg/ml HPD组、20μg/ml HPD组A549细胞活力较对照组明显下降,结果分别为(t=2.404,P=0.043)、(t=3.109,P=0.014)。50mW/cm~2组、75mW/cm~2、100mW/cm~2组A549细胞活力与对照组比较明显降低,结果分别为(t=4.029,P=0.004)、(t=4.480,P=0.002)、(t=5.756,P<0.001);Honchest 33258染色显示:与血卟啉衍生物(Hematoporphyrin Derivative,HPD)浓度增加呈正相关,细胞逐渐呈现出染色质收缩,核浓缩,并促进细胞凋亡;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,空白对照组(既无光敏剂孵育,也无不同强度激光照射)凋亡率为(2.529±0.14)%、单纯激光照射组(仅给予不同强度的激光照射,无光敏剂孵育)凋亡率为(2.372±0.17)%、单纯光敏剂组(仅给予血卟啉衍生物孵育,无不同强度的激光照射)凋亡率为(2.462±0.28)%、光动力治疗组凋亡率为(35.837±4.15)%,组间比较(F=385.369,P<0.05)差异具有统计学意义,光动力治疗组与空白组比较(t=-19.632,P<0.05),差异具有统计学意义;RT-PCR结果显示:HPD-PDT可以上调Bax、caspase-3 mRNA水平及下调Bcl-2、survivin mRNA水平,从而促进肿瘤细胞凋亡。结论:在体外HPD-PDT对肺腺癌A549细胞有显著的杀伤效应,呈现出光敏剂浓度及光照功率密度的依赖性,其杀伤效应与Bcl-2、Survivin、Caspase-3和Bax密切相关,其机制需要进一步实验研究。
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