A型流感病毒近年来对人类的感染事件屡次发生,并爆发了多次大规模的流感疫情,如:1918年的西班牙流感、1957年的亚洲流感、1968年的香港流感和2009年的甲型H1N1流感都给人类造成了极大的损失,多次疫情的发生证明A型流感病毒对公共卫生安全构成了极大的威胁。因此,A型流感病毒疫苗的存在,对人类有着至关重要的作用,疫苗是目前防控流感最有效且最具成本效益的措施。现用流感疫苗包括灭活疫苗和减毒活疫苗两类。其中灭活疫苗又包括全病毒灭活疫苗、裂解灭活疫苗和亚单位疫苗。在流行毒株与疫苗株病毒匹配的情况下,灭活疫苗对青壮年人群的保护率达66-86%。无论是灭活疫苗还是减毒活疫苗都是鸡胚来源的疫苗。以鸡胚作为基质生产流感疫苗,存在外源因子污染和将鸡传染病原因疫苗接种播散到人的潜在风险。此外,鸡胚供应周期长,当大流感来袭时难以满足大规模生产,尤其是禽流感病毒来袭时鸡胚来源更受影响。而利用细胞系生产疫苗可改善鸡胚生产疫苗的缺陷。本研究就是构建稳定表达流感蛋白PB2、PA的293T和MDCK细胞系,结合流感病毒反向遗传学技术体系可以为研制更为安全的复制缺陷型流感病毒减毒活疫苗提供有力的技术支持,为保障人类健康作出贡献。首先选用2009年甲型H1N1流感病毒鼠适应拯救病毒UI182为病毒株,构建稳定转染流感病毒MDCK细胞的MDCK-PB2、MDCK-PA细胞系并检测细胞系的细胞生物学特征,包括细胞形态,细胞增殖、克隆形成能力等,并与正常的MDCK进行比较;构建稳定转染流感病毒293T细胞的293T-PB2、293T-PA细胞系并检测细胞的细胞形态学为拯救流感病毒做基础。本研究建立了稳定表达流感病毒MDCK的MDCK-PB2、MDCK-PA细胞系以及293T细胞的293T-PB2、293T-PA细胞系,经过对细胞系的细胞生物学检测,表示细胞系可以稳定的传代、生长。该细胞系有望为以后流感病毒复制缺陷型疫苗发挥积极的作用。