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口蹄疫病毒(FMDV)每年在全球范围内造成畜牧业的巨大损失。现有防疫手段的不足使新型抗病毒办法的研究变得十分必要。RNA干扰(RNAi)是近年来新发现的一种真核生物基因转录后调控的分子机制,并且已对其抵抗病毒感染的能力开展了大量的探索性研究。但是,如何使得RNAi在有机体内能长期而又高效地发挥作用,仍然存在很多的困难。本文尝试使用转基因的手段来让组织培养细胞和小鼠获得自身表达抗FMDV的shRNA的能力。首先构建了转基因载体质粒PB-EN3D2B和PB-N3D2B,两者都能编码针对FMDV基因组2B与3D基因保守序列的shRNAo使用PB转座子作为转基因载体系统将PB-EN3D2B质粒转入猪细胞IBRS-2和仓鼠细胞BHK-21之后,筛选得到27个稳定的转基因细胞系。在攻毒实验中,6个IBRS-2转基因细胞系中的3个表现出了显著的抗O型和AsiaI型口蹄疫病毒感染的能力：当受到20～50 TCID50的病毒攻击时,转基因细胞系和对照细胞相比,抗病毒能力提高10～1000倍,持续48小时。其中效果最好的细胞系IB32-6在所有的三次攻毒实验中均完全抵御了病毒,未发生任何细胞病变。实验证明,这种抵抗能力是由内源性的shRNA带来的,并且与细胞系的转基因拷贝数无直接的联系。之后我们将PB-N3D2B质粒中表达针对FMDV基因组保守区段shRNA的2.5 kb功能片段采用DNA直接注射或慢病毒(lenti-virus)载体介导的方法导入小鼠受精卵。两种方式一共得到27只转基因原代小鼠,使用其中三只原代小鼠F3D2B-10、N3D2B-18和N3D2B-81的后代进行了O型FMDV的攻毒实验。实验表明,来自N3D2B-18和N3D2B-81家系的转基因乳鼠具有先天的抵抗3到6个LDso O型口蹄疫病毒感染的能力,存活率提高了19到27.3个百分点。但F3D2B-10和N3D2B-18家系在后续的攻毒实验中不能抑制AsiaI型口蹄疫病毒的复制。本项工作是第一次系统地在哺乳动物组织培养细胞和个体水平上尝试由转基因手段介导RNAi抵抗口蹄疫病毒感染的研究,为未来该技术在大型易感动物,如猪和牛上的应用提供了有益的资料。