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研究背景老年性痴呆(Alzheimer’s disease, AD)是发生在老年期的一种常见神经退行性疾病,β淀粉样蛋白(beta-amyloid peptide, Aβ)的神经毒性学说和脑老化是AD发病的两个重要学说。Aβ的降解有助于改善AD的症状,中性内肽酶(neprilysin, NEP)是重要的Aβ降解酶,其表达水平在老年人群中下降,提示NEP可能在Aβ降解和衰老进程中发挥重要作用,以NEP为靶点的研究可能对揭示AD的相关机制和治疗有一定的意义。中医学对AD病因的认识中,肾虚和衰老是两个重要的因素,因此治疗上也以补肾和抗衰老为两大重要治法,广泛运用具有补肾和抗衰老功效的方药。本课题组前期研究结果表明补肾益智方对AD可能有改善作用,有进一步研究的价值。表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)是在绿茶中含量很高的成分,研究显示其具有较强的抗衰老和神经保护作用,且绿茶在生活中比较常见而易得,如果对AD有改善作用,将具有重要的意义。目的：通过对补肾益智方中的几种中药单体人参皂苷(Rb1、Rg1、Rb3、Rg3)、丹皮酚、二苯乙烯苷、蛇床子素,以及绿茶主要成分EGCG进行筛选,筛选出能提高M146L细胞(双转APP/PS1基因的CHO细胞)活性的成分,并讲一步探讨其对NEP蛋白表达的影响,观察其对Aβ1-42的调节作用,为抗AD的研究提供参考。方法：用MTT法对补肾益智方中的几种单体人参皂苷(Rb1、Rg1、Rb3、Rg3)、丹皮酚、二苯乙烯苷、蛇床子素,以及绿茶主要成分EGCG对CHO细胞和M146L细胞活性作用进行筛选,确定能提高M146L细胞(双转APP/PS1基因的CHO细胞)活性的成分。用EdU法进一步验证筛选出的成分对M146L细胞增殖作用的影响,明确药物发挥促增殖作用的最佳浓度和作用时间。Western blot法和免疫细胞化学法检测EGCG对M146L细胞NEP、Aβ1-42蛋白表达的影响,ELISA法检测EGCG对M146L细胞Aβ1-42分泌量的影响,Western blot法检测EGCG对M146L细胞Bax、Bc1-2蛋白表达的影响。结果：在实验设置的药物浓度梯度下,人参皂苷Rg3、丹皮酚、蛇床子素、人参皂苷Rbl对M146L细胞增殖无明显改变,人参皂苷Rb3(16umol/L)作用于细胞48h、二苯乙烯苷(16umol/L)作用于细胞24h和48h后表现出促增殖作用。EGCG能提高M146L细胞的活力,并减少M146L细胞内Aβ1-42的表达,胞外Aβ1-42分泌量虽有增加的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。进一步研究发现EGCG上调M146L细胞NEP表达,差异有统计学意义,而Bax和Bcl-2变化不明显。结论：EGCG可能通过上调NEP水平从而抑制Aβ神经毒性,发挥神经保护作用,在AD的治疗上可能有进一步研究的潜能。