正常红系细胞分化与小鼠红白血病(MEL)细胞诱导分化过程中中间纤维—核纤层—核骨架体系的变化及其与癌基因c-myc表达关系的研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiangweiwei_521
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中间纤维—核纤层—核骨架体系是近年来发现广泛存在于真核细胞中与维持细胞形态及功能状态密切相关的一个完整的立体网络系统,研究其与细胞分化及基因表达调控的关系是当今生物学一个崭新领域。本研究选用正常小鼠胚肝幼红细胞、成鸡和鸡胚红细胞以及在红细胞分化因子(EDF)诱导下的红系肿瘤细胞株—小鼠红白血病(MEL)细胞为材料,研究在进化上自然去核(哺乳类)和不去核(鸟类)红细胞类型在细胞增殖分化、去分化(恶性变)和再分化(恶性逆转)过程中中间纤维—核纤层—核骨架体系的变化及其规律,希图从进化和分化两方面揭示哺乳类红细胞终末分化期自然排核的奥秘,分析EDF对肿瘤细胞恶性调控的机制,包括诱导分化过程中癌基因c-myc表达受抑与MEL细胞核骨架的可能关系,旨在从基因水平探讨肿瘤细胞恶性调控的可能机制。 (一) 应用选择性系列抽提结合整装细胞电镜技术,对不排核的鸟类红细胞(鸡胚原始红细胞、鸡成熟红细胞)和自然排核的哺乳类红细胞(小鼠胚肝中、晚幼红细胞)的中间纤维—核纤层—核骨架体系的形态结构进行了比较观察。在电镜下可见鸡胚和成年鸡红细胞的中间纤维由束状或颗粒状的物质连接交织成为致密的网络,直接与较厚的核纤层和质膜相连接。核骨架由粗细不一的纤维形成立体网络,纤维与核纤层密切相连。小鼠胚肝中幼成红细胞中的中间纤维较鸡红细胞中的为纤细和稀疏,核纤层较稀薄,核骨架网络较致密,并在纤维上附有大小不等的颗粒状物质。小鼠晚幼红细胞中间纤维更为稀疏,排核前尤为明显。排核后的网织红细胞不含中间纤维,但在整装的立体图片中可以见到交织成网状的膜骨架。用系列抽提后的中间纤维—核纤层—核骨架物质进行SDS-PAGE电泳,和以抗波形纤维蛋白(vimentin)抗体所做的western印迹法探测结果表明,成年鸡、鸡胚红细胞以及小鼠胚肝幼成红细胞的中间纤维成份均含波形纤维蛋白,出现与抗体呈阳性反应的条带,而且成鸡和鸡胚成红细胞波形纤维蛋白的含量高于小鼠胚肝中、晚幼成红
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