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第一部分白藜芦醇抑制白血病细胞生长的作用及其机制目的观察白藜芦醇(Res)对白血病细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响,为其作为抗白血病药物的应用提供理论和实验依据。方法以人髓性白血病细胞系K562为研究对象,以含10%胎牛血清的RMPI1640培养基于37℃,5%CO2培养箱培养,隔日换液传代,实验选取细胞活性均在98%以上。采集正常健康成人外周静脉血,以淋巴细胞分离液进行密度梯度离心获得外周血单个核细胞(PBMNC),培养于上述培养基。MTT法检测不同浓度Res作用于K562细胞、NPBMNC后细胞的增殖抑制率,并进行比较。Annein-V-FITC/PI双标流式细胞术观察不同浓度Res对K562细胞周期及细胞凋亡的影响。结果(1)细胞培养各组之间K562细胞抑制率与Res浓度及培养时间呈正相关性,一定浓度范围内Res对PBMNC无显著抑制作用,表明Res抑制K562细胞增殖可能具有选择性作用。(2)随着Res浓度的增加,K562细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于S期,G2/M期细胞比例减少。(3)Res能够诱导K562细胞凋亡。结论Res可显著抑制白血病细胞的生长,其作用呈浓度和时间依赖性;诱导白血病细胞周期停滞及凋亡是Res抑制白血病细胞生长的机制;Res对正常人PBMNC生长无明显抑制作用,而选择性作用于白血病细胞。第二部分白藜芦醇对白血病细胞RAS系统的影响及意义目的观察白血病患者体内肾素水平的变化,同时在体外观察血管紧张素(AngⅡ)对白血病细胞的增殖抑制作用,及Res对AngⅡ水平的影响。以期探讨肾素-血管紧张素系统(RAS)在白血病发生发展中的作用及Res抗白血病的机制。方法采集30例急慢性白血病患者骨髓和外周血,以7例血小板减少性紫癜患者作为正常对照,放免法检测标本中的肾素浓度。体外试验以人髓性白血病细胞系K562为研究对象,以含10%胎牛血清的RMPI1640培养基于37℃,5%C02培养箱培养,隔日换液传代,实验选取细胞活性均在98%以上。MTT法检测不同浓度AngⅡ作用于K562细胞后增殖抑制率。同样采用上述培养的K562细胞,以100、200μmol·L-1浓度Res作用48小时后,放免法检测两种浓度Res对细胞培养上清液中AngⅡ含量的影响。结果(1)急性白血病患者骨髓组织中肾素浓度显著增高,与正常对照组相比有显著性差异(P值均<0.05);而慢性髓细胞白血病患者骨髓组织中肾素浓度虽高于正常对照,但无显著性差异(P=0.562)。8例急性白血病患者同时检测了骨髓和外周血中肾素水平,两者相比有显著性差异(P=0.043)。(2)AngⅡ对K562细胞具有促进增殖的效应,在一定范围内与浓度时间成正比。(3)Res作用48小时后细胞上清液中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量明显降低。结论急性白血病患者骨髓局部存在RAS的异常;K562细胞系中存在AngⅡ的自分泌途径,AngⅡ对K562细胞增殖具有促进作用; Res可以剂量依赖方式抑制AngⅡ的生成,推测与Res具备血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)的活性有关。提示Res有可能通过抑制AngⅡ的生成而抑制白血病细胞增殖。第三部分白藜芦醇对白血病血管新生的抑制作用及机制目的体外研究Res对内皮细胞增殖的作用以及Res对白血病细胞血管内皮细胞生长因子的影响。探讨Res抗白血病血管新生的作用及机制。方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和白血病U937细胞系为研究对象,分离人脐静脉内皮细胞。接种于预先包被1%明胶的25cm2塑料培养瓶中,待其长成完全融合状单层细胞。Ⅷ因子SABC法鉴定其为内皮细胞,取3～6代细胞用于实验。用体外小管形成实验观察不同浓度的Res对HUVEC微血管形成的影响。U937细胞培养方法同前一部分,用ELISA法检测白藜芦醇对U937细胞上清中VEGF水平的影响。结果(1)当接种在基质胶上时,正常HUVECs可形成完整的管状结构,加入Res后产生剂量依赖的基质胶诱导小管生成受抑。(2)Res作用于U937细胞24、48h后,细胞上清液中VEGF含量与空白对照比较,表达量显著减低(P<0.05),表明Res能抑制U937细胞分泌VEGF,且与Res浓度成正比。结论Res在体外能明显抑制HUVECs微血管的形成,表明Res具备抗血管新生的作用;白血病细胞存在VEGF的自分泌,Res能显著抑制U937白血病细胞分泌VEGF,提示是其抑制血管新生的机制之一。