基于自由基的动物繁殖机能的损伤与修复机理及其调控技术研究

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目的:通过建立基于高不饱和脂肪酸诱导的自由基动物损伤模型,从细胞水平和分子水平研究自由基对动物生殖机能的损伤及相关繁殖基因表达的影响及其调控技术,揭示自由基与动物繁殖性能表达的关系,研究微生物源复合自由基清除剂对动物繁殖机能的修复技术,为提高良种畜禽的繁殖性能提供理论依据。方法:40只70日龄雄性SD大鼠随机分成4组,每组10只。对照组饲喂基础日粮,高不饱和脂肪酸自由基损伤模型组(高脂组)在日粮中添加200g/kg葵花籽油,清除组在日粮中添加20g/kg微生物源性抗氧化剂,高不饱和脂肪酸+清除组(修复组)在日粮中同时添加葵花籽油和微生物源性抗氧化剂,42天结束试验。试验第21、42天,每组各取出5只,处死解剖,心脏采血,取出睾丸、附睾称重,计算脏器系数并作精子分析,测定血清中SOD、GSH-Px活性和NO、MDA含量和睾酮含量。制作肝细胞及精原细胞悬液,应用单细胞电泳实验方法,检测微生物自由基清除剂对多不饱和脂肪酸诱生自由基动物DNA损伤的保护作用。利用RT-PCR方法检测雄激素受体基因(AR mRNA)分别在肝脏和睾丸组织中的表达量。本试验采用Excel软件进行数据处理,以t检验法进行组间比较。结果:在试验第21天,高脂组与对照组相比大鼠血清中SOD活力降低,但差异不显著;MDA和NO含量有所增加,但差异亦不显著(P>0.05) ,仅GSH-Px活力显著下降(P<0.05)。试验第42天,高脂组的大鼠血清中SOD和GSH-Px活力分别比对照组降低3.6%和7.97%,且差异显著(P<0.05),MDA含量显著增加(P<0.05),并产生大量的NO,且比对照组高26.97%(P<0.05);肝细胞DNA明显损伤(P<0.05);睾丸和附睾重量系数降低,差异显著(P<0.05),精子数目、精子活动率显著降低(P<0.05),血清睾酮比对照组下降22.17%,且差异显著(P<0.05)。日粮中添加微生物源性抗氧化剂能显著提高大鼠血清中SOD和GSH-Px活力(P<0.05),降低血清中的MDA含量和NO水平(P<0.05);修复组的肝细胞和睾丸精原细胞与高脂组相比,尾部DNA含量,尾长、尾矩、Olive尾矩均有所降低,且差异显著(P<0.01),DNA损伤明显得到修复;添加微生物源性抗氧化剂后,与相应对照组相比,大鼠睾丸和附睾重量系数增加(P<0.05);血清中睾酮含量升高(P<0.05),精子活动率增强(P<0.05),精子数目和a级精子数显著增加(P<0.05);睾丸AR mRNA表达量升高,且差异极显著(P<0.01)。结论:高不饱和脂肪酸长期饲喂大鼠可导致大量自由基的生成,脂质过氧化作用增强,机体受损,繁殖能力下降。微生物源性抗氧化剂对高不饱和脂肪酸致大鼠组织的氧化损伤具有明显的修复作用,能够显示出较高的清除自由基的能力,起到了较好的氧化和抗氧化平衡的效果,能够增加精子的数量,提高精子的品质、血清睾酮含量和AR mRNA表达量,增强其繁殖性能。可以用来解释在氧化应激环境下,动物繁殖能力降低的原因,并能够提供改善繁殖力的机理。
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