桑叶总黄酮的提取、纯化及其免疫调节活性研究

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目前我国桑树种质资源居世界第一位,拥有丰富的桑叶资源,桑叶作为一种优良的中药材,现已经被国家卫生部列入既是食品又是药品的品种名单,桑叶作为药食两用的价值得到认可,总黄酮是桑叶药理作用的主要成分之一,在桑叶中含量较高,对其深入研究具有十分重要的意义。本文对桑叶总黄酮的提取、纯化、免疫调节进行了较为系统的研究,以期为桑叶总黄酮的开发利用提供理论参考。试验主要结果如下:  (1)桑叶经石油醚处理后,用Al(NO3)3-NaNO2比色法测定总黄酮含量,方法简单,重复性好;采用响应面分析法优化了桑叶总黄酮的提取,优化后桑叶总黄酮最佳提取工艺为:提取时间为137 s,超声-微波功率为280 w,原料质量浓度为0.0357 g/mL,提取次数为2次,桑叶黄酮提取率为22.50 mg/g。  (2)从AB-8、D101和X-5三种非极性和弱极性大孔吸附树脂筛选出AB-8大孔树脂纯化桑叶黄酮,以上试验实现了从桑叶提取黄酮,纯化得到精制黄酮,冷冻干燥后测定,纯度达到40.3%。  (3)桑叶黄酮的体内免疫调节活性评价:体内动物试验结果表明,各剂量组桑叶黄酮均可显著提高小鼠校正碳廓清指数、血清溶血素水平、抗体形成数、红细胞C3b、降低红细胞免疫复合物花环率RBC-IC;200,300 mg/(kg·bw)剂量组桑叶黄酮可显著提高小鼠校正碳廓清指数、抗体形成数等,表明桑叶黄酮的200、300 mg/(kg·bw)剂量对小鼠的免疫调节作用较好。  (4)桑叶黄酮体外免疫调节活性评价:体外脾淋巴细胞增殖作用试验表明:300μg/mL剂量桑叶黄酮能够明显刺激脾淋巴细胞增殖,体外脾淋巴细胞转化实验表明:400μg/mL桑叶黄酮能够明显促进脾淋巴细胞分化转化的能力,并呈现一定的剂量依赖关系。
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