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猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis,TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)引起的一种以呕吐、水样腹泻、脱水等为主要症状的肠道传染性疾病。仔猪感染后死亡率能达到100%,该病的爆发和流行给养猪业造成巨大的经济损失。TGEV核衣壳蛋白(N蛋白)是一种重要的病毒抗原,感染机体后表达量大,感染早期即可检测到TGEVN蛋白抗体,是建立间接ELISA方法的理想抗原。本研究利用重组TGEV抗原蛋白建立的间接ELISA方法,能够检测猪血清TGEV抗体水平。主要研究内容包括如下2个方面:1.采用RT-PCR方法对TGEV江苏分离株(JS2012)的N基因进行了扩增,将其插入到pET28a载体上,经酶切鉴定、测序鉴定正确后,转化至感受态细胞BL21(DE3)中,并进行诱导表达。表达产物经SDS-PAGE电泳分析,结果表明目的蛋白成功表达,且分子质量为42ku;该蛋白能够以融合蛋白的形式表达,可在实验室内大量制备并进行纯化;蛋白免疫印迹结果显示,表达的N蛋白能具有良好的反应原性;2.使用该重组N蛋白建立了抗体检测间接ELISA方法,对各组分和步骤进行了优化,确定最佳工作条件为:以0.152ug/ml的抗原包被浓度于37℃℃包被2h,用5%的脱脂乳封闭30min,待检血清作1:80稀释,于37℃℃反应30min后,酶标二抗作1:10000稀释后,于37℃反应30min后,加入显色液于室温下避光反应10min。另外,包被的重组N蛋白不与PEDV、CSFV、PRRSV、FMDV和PCV2阳性血清发生交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;阳性血清稀释到1:1280仍检测为阳性,表明该方法具有良好的敏感性;批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的稳定性;分别用间接ELISA与病毒血清中和试验检测80份临床样品,间接ELISA方法的阳性检出率为81.25%,病毒血清中和试验的阳性检出率为82.5%,二者的符合率为91.25%,表明建立的ELISA方法具有良好的准确性。本研究建立的间接ELISA为猪传染性胃肠炎血清抗体的快速检测提供了一种可靠、准确的方法。