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目的:筛选出与冠心病相关的miR-328,为冠心病的辅助诊断提供潜在的诊断指标,并初步探讨miR-328发挥作用的分子机制。方法:1从GEO数据库中查找冠心病相关的miRNA芯片数据,并分析有表达差异的miRNA。数据集GSE49823,包括13例不稳定心绞痛和13例健康对照,用GE02R做差异分析。2收集冠心病病人和非冠心病病人血清标本,同时提取血清和外泌体中的RNA,检测血清及外泌体中miR-328的表达;3 Q-PCR检测ox-LDL刺激2种内皮细胞HCAEC和HUVEC后miR-328的表达;4 在 HCAEC 和HUVEC 细胞中转染 miR-328 minics 与 miR-328 inhibitor,DAPI染色检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖;鬼笔环肽染色检测细胞通透性;Q-PCR检测炎症因子mRNA的表达;5 用 miRbase 和 TargetSan Human5.2 预测 miR-328 下游靶基因;6 在 HCAEC 和 HUVEC 细胞中转染 miR-328 minics 与 miR-328 inhibitor,Western Blot检测NEXN蛋白的变化,Q-PCR检测NEXN mRNA的变化;7荧光素酶报告实验验证mi R-328与下游靶基因NEXN是否直接相互作用。8 Q-PCR 和 Westren blot 检测 ox-LDL 刺激 HCAEC 和 HUVEC 后 NEXN 的 mRNA 和蛋白表达;9在HCAEC和HUVEC细胞中转染si-NEXN,DAPI染色检测细胞凋亡;MTT法检测细胞增殖;鬼笔环肽染色检测细胞通透性;PCR法检测炎症因子mRNA表达差异;10 用 Westren blot 检测转染 miR-328 inhibitor 后 cleaved-caspase3 的蛋白表达;结果:1根据Fold change>2,P<0.05,芯片中差异表达且有统计学意义的miRNA共有203个,在冠心病组中表达均上调;其中miR-328表达上调2.431倍（P<0.025）;2与对照组相比,冠心病组血清中miR-328的表达上调3.25倍,（P<0.026）;冠心病组血清外泌体中miR-328的表达上调2.24倍,（P<0.0074）;3 ox-LDL刺激内皮细胞HCAEC和HUVEC时,miR-328表达分别上调4倍（P=0.03）和 2.5 倍（P=0.03）;4 20 μ g/ml的ox-LDL刺激HUVEC 8小时,转染miR-328 minics诱导内皮细胞的凋亡率为40%,NC组为30%;20 μ g/ml的ox-LDL刺激HUVEC 12小时,转染miR-328 inhibitor组细胞凋亡率为40%,NC组为50%;HCAEC转染miR-328 minics后炎症因子hICAM-1和hMCP-1的mRNA水平上调约2倍,转染miR-328 inhibitor组,炎症因子mRNA水平表达为原来的0.7倍;MTT法检测4个组在570nm处的吸光度值多次测定均为 1.5±0.2;5预测NEXN可能为miR-328下游靶基因;6 转染 miR-328 minics 时,NEXN 蛋白水平下调;转染 miR-328 inhibitor 时,NEXN蛋白水平上调;NEXN mRNA均没有变化。7 过表达 miR-328 minics/NEXN-pmirGLO 和 NC/NEXN-pmirGLO 的荧光强度比值为0.598;同时过表达 miR-328 minics/NEXN-pmirGLO-UTR 比 NC/NEXN-pmirGLO-UTR 荧光强度的比值为1.517;miR-328与NEXN直接相互作用;8 ox-LDL刺激内皮细胞HCAEC和HUVEC时,NEXN蛋白与mRNA水平均下调;9 si-NEXN转染HUVEC后,细胞凋亡率42%;炎症因子上调约2倍;细胞骨架完整,不影响细胞通透性;细胞增殖通过MTT法评估,比较了各组在570nm处的吸光度均为 1.25±0.18;10 转染 miR-328 inhibitor 后,cleaved-caspase3 的蛋白表达下调;结论:1.芯片数据差异分析结果显示循环miR-328在冠心病组的表达水平高非冠心病组;2.循环miR-328在冠心病组血清与外泌体中的的表达水平均高非冠心病组;3.ox-LDL刺激内皮细胞后促进了 miR-328的表达;4.miR-328通过与NEXN直接相互作用介导内皮细胞凋亡率增加及炎症因子释放率增加;不影响细胞增殖与细胞通透性;