【摘 要】
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目的探讨p22phox基因沉默在高浓度葡萄糖诱导的内皮细胞活性氧生成和细胞凋亡中的作用及其机理。方法用Ⅱ型胶原酶消化分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),在倒置显微镜下观察
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目的探讨p22phox基因沉默在高浓度葡萄糖诱导的内皮细胞活性氧生成和细胞凋亡中的作用及其机理。方法用Ⅱ型胶原酶消化分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),在倒置显微镜下观察其形态。免疫组化法检测HUVECs内第Ⅷ因子相关抗原的表达。将原代培养的人脐静脉内皮细胞分为对照组、高糖组、高糖+siRNA转染组和siRNA转染组。采用Western-blot检测p22phox和caspase-3蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内活性氧水平及细胞凋亡率,Hochest33342染色观察细胞的胞核形态,分光光度计检测caspase-3酶活性。结果分离得到的HUVECs均表达第Ⅷ因子相关抗原;siRNA能有效抑制p22phox表达;高葡萄糖能诱导p22phox表达;与对照组相比,高糖组细胞p22phox蛋白水平、活性氧水平、细胞凋亡率、caspase-3活性和蛋白水平均明显增高(P < 0.05);高糖+siRNA转染组的细胞p22phox蛋白水平、活性氧水平、细胞凋亡率、caspase-3活性和蛋白水平均明显低于高糖组(P < 0.05)。结论1.转染siRNA-p22phox能抑制内皮细胞p22phox表达;2.抑制p22phox表达能降低高糖所致的内皮细胞活性氧生成和细胞凋亡。
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