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茵桅黄复方具有清热解毒、退黄降酶的作用,临床用于新生儿黄疸、急慢性肝炎和其他重症肝炎等的治疗,效果显著;但近年来频频出现的药物过敏反应使得茵栀黄尤其是其注射液的应用受到限制。中药药效物质大多需经药物代谢酶催化转化,同时可能对药物代谢酶产生抑制或诱导作用,从而产生药物之间的代谢相互作用。尿苷二磷酸葡醛酸转移酶(UGTs)位于细胞内质网腔,是人体中最重要的Ⅱ相药物代谢酶。它们能够催化尿苷-5’-二磷酸葡醛酸(UDPGA)与多种亲脂性底物结合,该结合反应是多种外源物和内源物排出体外的重要途径。基于本实验室先前建立的茵栀黄中药指纹图谱,化学成分苯丙素类、黄酮及其苷类、蒽醌类、环烯醚萜苷类等天然产物可能影响着生物体内UGTs的代谢反应。因此从药物代谢谱分析的角度研究茵栀黄中药成分与UGTs的相互作用对于探讨茵栀黄中药制剂安全性问题具有一定的方法学意义。本文运用体外代谢孵育体系探究了茵栀黄重要活性成分与UGT多种亚型酶的相互作用,主要研究内容包括:1)分别选取9种探针底物雌二醇、鹅去氧胆酸、三氟拉嗪、5-羟色胺、丙泊酚、齐多夫定、尼古丁、S-奥沙西泮、睾酮,运用LC-MS/MS技术建立了一个能同时评价人肝微粒体中9种UGT亚型酶UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9、2B7、2B10、2B15和2B17的活性分析方法。建立并验证了一针进样多组分同时定量的色谱分析方法;此外发现传统方法以底物的质谱响应来定量相应的代谢物是不可行的。2)通过优化体外孵育条件,包括丙甲甘肽、单内酯、氯化镁以及缓冲溶液的pH,建立UGT活性筛选与评价体系,考察了茵栀黄中11种组分(京尼平苷酸、绿原酸、表儿茶素、栀子苷、木犀草苷、槲皮素、汉黄芩苷、滨蒿内酯、大黄素、大黄酚)对9种UGT亚型酶介导的Ⅱ相药物代谢的抑制作用,发现表儿茶素、槲皮素、汉黄芩苷具有明显的抑制作用,进一步确认槲皮素和汉黄芩苷分别对UGT1A4和UGT1A1产生非竞争性抑制,抑制参数Ki分别为11.6和59.8μM。3)考察人肝微粒体中葡萄糖醛酸转移酶对茵栀黄中含羟基、羧基等中药成分的催化作用,并讨论UGT酶对这些植物单体催化作用的空间立体选择性。首次发现UGT酶对含一个葡萄糖苷基团的黄酮苷类化合物也具有催化结合作用,并比较9种UGT同工酶催化活性的差异,其中以UGT1A1的催化效率最高。