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目的：肝脏酒精性损伤是肝脏疾病中常见的组织损伤。肝脏酒精性肝损伤对肝病的发展、肝脏手术效果和患者生存预后至关重要。如何保护肝细胞，减少肝脏酒精性肝损伤的发生是热门话题。本研究的目的是研究小鼠肝脏酒精性肝损伤过程中高迁移率群蛋白1(High-mobility group box 1,HMGB1)的表达和细胞损伤的变化。探讨HMGB1调节TLR-4信号通路对酒精处理诱导肝脏细胞损伤的影响，以揭示肝脏酒精损伤过程中的潜在机制，为其预防和治疗提供新思路。本研究分为四个部分。
第一部分血清HMGB1水平与酒精性肝病的相关性
方法：
1.本研究收集102例酒精性肝病患者和96例正常人临床资料，以明确酒精性肝损伤患者血清HMGB1水平与正常人的差异。并收集病理科存放的肝脏组织标本。
2.采用相关性分析研究：血清HMGB1与ALT水平的相关性；血清HMGB1与AST水平的相关性；血清HMGB1与TBil水平的相关性。
3.使用SPSS统计软件(版本19.0)，进行单因素方差分析和t检验，两组指标相关性采用相关性分析，P＜0.05作为差异，具有统计学意义。
结果：
1．酒精性肝病病人血清HMGB1含量显著高于正常人血清HMGB1含量，差别具有统计学意义(P＜0.001)。
2.酒精性肝病患者血清HMGB1与ALT水平存在正相关；酒精性肝病患者血清HMGB1与AST水平存在正相关；酒精性肝病患者血清HMGB1与TBil水平存在正相关。
小结
1．酒精性肝病患者血清HMGB1水平显著升高;
2．酒精性肝病患者的HMGB1水平与疾病严重程度之间存在显著相关性。
第二部分HMGB1在小鼠酒精性肝损伤中的表达
方法：
1.采用C57BL/6雄性小鼠建立酒精性肝损伤模型,检测组血清ALT、AST、TBil和HMGB1水平的变化。
2.用HE染色法进行正常组与模型组肝组织病理学检测。
3.qRT-PCR检测正常组与模型组中，小鼠肝组织HMGB1mRNA的表达变化。
4.使用SPSS统计软件(版本19.0)，进行单因素方差分析和t检验，P＜0.05作为差异，具有统计学意义。
结果：
1.模型组小鼠血清中的HMGB1比正常组高，差异有统计学意义(P＜0.05)；
2.模型组小鼠血清中的ALT、AST、TBil均比正常组高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
3.与正常组小鼠肝组织相比，模型组小鼠肝组织可观察到部分区域肝细胞水肿，脂肪变和点灶状坏死区域等。
4.模型组小鼠肝组织内的HMGB1mRNA相对表达含量较正常组增加，差别有统计学意义(P＜0.001)。
5.在正常组，HMGBl主要表达在肝细胞核内，而在模型组肝细胞中，细胞核内的HMGBl减少，而细胞质的HMGBl增多。
小结：
1．酒精处理后小鼠肝组织中呈典型酒精性肝损伤的病理特征;
2．小鼠血清HMGB1水平与酒精性肝损伤的损伤程度有一定的相关性;
3．酒精处理后小鼠肝组织中HMGB1mRNA的表达显著增加。
第三部分高通量抗体芯片研究小鼠酒精性肝损伤凋亡相关蛋白及通路的表达特征
方法：
建立小鼠酒精性肝损伤模型，采用高通量抗体芯片研究小鼠酒精性肝损伤凋亡相关蛋白及通路的表达特征。
结果
研究发现Caspase、NF-κB、TLR通路与HMGB1关系密切，为本项目的后续研究提供理论基础及依据。
第四部分改变HMGB1表达对小鼠肝损伤的影响
方法
1.采用C57BL/6雄性小鼠建立酒精性肝损伤模型，建立小鼠肝脏酒精模型，分为正常组，酒精性肝损伤模型组和HMGB1释放抑制剂组，检测各组血清ALT、AST、TBil和HMGB1水平的变化。
2.用HE染色法进行各组病理学检测。
3.用HMGB1siRNA预处理肝细胞系AML12细胞，建立酒精性肝细胞损伤模型，以明确酒精处理诱导AML12细胞存活能力的影响。qRT-PCR检测各组肝组织HMGB1mRNA的表达变化。Westernblot检测各组肝组织自噬蛋白HMGB1、TLR-4、NF-κB、Caspase-3表达变化，以探讨HMGB1调节NF-κB通路对酒精处理诱导AML12细胞损伤影响。
4.使用SPSS统计软件(版本19.0)，进行单因素方差分析和t检验，P＜0.05作为差异，具有统计学意义。
结果
1．HMGB1释放抑制剂甘草酸可减少小鼠肝细胞核内HMGB1释放。
2．与模型组相比，抑制剂组小鼠血清ALT、AST、TBil水平降低，差异有统计学意义(P＜0.001)。
3．在模型组肝组织中可观察到部分区域肝细胞出现水肿、脂肪变和点灶状坏死区域；抑制剂组肝组织病变较模型组上述表现较少见。
4．模型组肝细胞细胞核内的HMGB1减少，而细胞质的HMGB1增多；而在抑制剂组，HMGB1主要表达在细胞核内。
5．MTT结果显示：提示肝细胞酒精处理过程中，抑制HMGB1表达可增加肝细胞的存活率，减轻肝细胞的损伤。
6．稳定肝细胞核内HMGB1的释放，可以抑制肝细胞TLR-4/NF-κB/Caspase-3通路的激活，降低肝细胞凋亡的可能性。
小结：
1．抑制HMGB1释放，可以显著改善小鼠酒精性肝损伤病损程度，抑制肝细胞凋亡、促进肝细胞增值；
2．抑制HMGB1的释放，抑制TLR-4通路介导的肝细胞损伤;
3．抑制HMGB1基因表达可减少肝细胞凋亡，促进肝细胞增殖;
4．HMGB1/TLR-4通路参与了酒精性肝损伤的过程。
全文结论：
1．酒精性肝病患者血清HMGB1水平显著升高，HMGB1水平与酒精性肝病患者的严重程度之间存在显著相关性。
2．小鼠经酒精处理后，其肝脏组织出现典型的酒精性肝损伤病理特征，肝细胞中HMGB1释放，且肝脏组织HMGB1mRNA表达显著增加；HMGB1水平与小鼠酒精性肝损伤的程度之间存在相关性。
3．减少HMGB1释放，可抑制TLR-4通路所介导的酒精性肝细胞损伤，促进肝细胞损伤修复；抑制HMGB1的基因表达后可减少肝细胞凋亡、促进肝细胞增值，提示HMGB1/TLR-4通路参与了酒精性肝损伤的病理生理过程。
第一部分血清HMGB1水平与酒精性肝病的相关性
方法：
1.本研究收集102例酒精性肝病患者和96例正常人临床资料，以明确酒精性肝损伤患者血清HMGB1水平与正常人的差异。并收集病理科存放的肝脏组织标本。
2.采用相关性分析研究：血清HMGB1与ALT水平的相关性；血清HMGB1与AST水平的相关性；血清HMGB1与TBil水平的相关性。
3.使用SPSS统计软件(版本19.0)，进行单因素方差分析和t检验，两组指标相关性采用相关性分析，P＜0.05作为差异，具有统计学意义。
结果：
1．酒精性肝病病人血清HMGB1含量显著高于正常人血清HMGB1含量，差别具有统计学意义(P＜0.001)。
2.酒精性肝病患者血清HMGB1与ALT水平存在正相关；酒精性肝病患者血清HMGB1与AST水平存在正相关；酒精性肝病患者血清HMGB1与TBil水平存在正相关。
小结
1．酒精性肝病患者血清HMGB1水平显著升高;
2．酒精性肝病患者的HMGB1水平与疾病严重程度之间存在显著相关性。
第二部分HMGB1在小鼠酒精性肝损伤中的表达
方法：
1.采用C57BL/6雄性小鼠建立酒精性肝损伤模型,检测组血清ALT、AST、TBil和HMGB1水平的变化。
2.用HE染色法进行正常组与模型组肝组织病理学检测。
3.qRT-PCR检测正常组与模型组中，小鼠肝组织HMGB1mRNA的表达变化。
4.使用SPSS统计软件(版本19.0)，进行单因素方差分析和t检验，P＜0.05作为差异，具有统计学意义。
结果：
1.模型组小鼠血清中的HMGB1比正常组高，差异有统计学意义(P＜0.05)；
2.模型组小鼠血清中的ALT、AST、TBil均比正常组高，差异有统计学意义(P＜0.05)。
3.与正常组小鼠肝组织相比，模型组小鼠肝组织可观察到部分区域肝细胞水肿，脂肪变和点灶状坏死区域等。
4.模型组小鼠肝组织内的HMGB1mRNA相对表达含量较正常组增加，差别有统计学意义(P＜0.001)。
5.在正常组，HMGBl主要表达在肝细胞核内，而在模型组肝细胞中，细胞核内的HMGBl减少，而细胞质的HMGBl增多。
小结：
1．酒精处理后小鼠肝组织中呈典型酒精性肝损伤的病理特征;
2．小鼠血清HMGB1水平与酒精性肝损伤的损伤程度有一定的相关性;
3．酒精处理后小鼠肝组织中HMGB1mRNA的表达显著增加。
第三部分高通量抗体芯片研究小鼠酒精性肝损伤凋亡相关蛋白及通路的表达特征
方法：
建立小鼠酒精性肝损伤模型，采用高通量抗体芯片研究小鼠酒精性肝损伤凋亡相关蛋白及通路的表达特征。
结果
研究发现Caspase、NF-κB、TLR通路与HMGB1关系密切，为本项目的后续研究提供理论基础及依据。
第四部分改变HMGB1表达对小鼠肝损伤的影响
方法
1.采用C57BL/6雄性小鼠建立酒精性肝损伤模型，建立小鼠肝脏酒精模型，分为正常组，酒精性肝损伤模型组和HMGB1释放抑制剂组，检测各组血清ALT、AST、TBil和HMGB1水平的变化。
2.用HE染色法进行各组病理学检测。
3.用HMGB1siRNA预处理肝细胞系AML12细胞，建立酒精性肝细胞损伤模型，以明确酒精处理诱导AML12细胞存活能力的影响。qRT-PCR检测各组肝组织HMGB1mRNA的表达变化。Westernblot检测各组肝组织自噬蛋白HMGB1、TLR-4、NF-κB、Caspase-3表达变化，以探讨HMGB1调节NF-κB通路对酒精处理诱导AML12细胞损伤影响。
4.使用SPSS统计软件(版本19.0)，进行单因素方差分析和t检验，P＜0.05作为差异，具有统计学意义。
结果
1．HMGB1释放抑制剂甘草酸可减少小鼠肝细胞核内HMGB1释放。
2．与模型组相比，抑制剂组小鼠血清ALT、AST、TBil水平降低，差异有统计学意义(P＜0.001)。
3．在模型组肝组织中可观察到部分区域肝细胞出现水肿、脂肪变和点灶状坏死区域；抑制剂组肝组织病变较模型组上述表现较少见。
4．模型组肝细胞细胞核内的HMGB1减少，而细胞质的HMGB1增多；而在抑制剂组，HMGB1主要表达在细胞核内。
5．MTT结果显示：提示肝细胞酒精处理过程中，抑制HMGB1表达可增加肝细胞的存活率，减轻肝细胞的损伤。
6．稳定肝细胞核内HMGB1的释放，可以抑制肝细胞TLR-4/NF-κB/Caspase-3通路的激活，降低肝细胞凋亡的可能性。
小结：
1．抑制HMGB1释放，可以显著改善小鼠酒精性肝损伤病损程度，抑制肝细胞凋亡、促进肝细胞增值；
2．抑制HMGB1的释放，抑制TLR-4通路介导的肝细胞损伤;
3．抑制HMGB1基因表达可减少肝细胞凋亡，促进肝细胞增殖;
4．HMGB1/TLR-4通路参与了酒精性肝损伤的过程。
全文结论：
1．酒精性肝病患者血清HMGB1水平显著升高，HMGB1水平与酒精性肝病患者的严重程度之间存在显著相关性。
2．小鼠经酒精处理后，其肝脏组织出现典型的酒精性肝损伤病理特征，肝细胞中HMGB1释放，且肝脏组织HMGB1mRNA表达显著增加；HMGB1水平与小鼠酒精性肝损伤的程度之间存在相关性。
3．减少HMGB1释放，可抑制TLR-4通路所介导的酒精性肝细胞损伤，促进肝细胞损伤修复；抑制HMGB1的基因表达后可减少肝细胞凋亡、促进肝细胞增值，提示HMGB1/TLR-4通路参与了酒精性肝损伤的病理生理过程。