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类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种慢性、炎性、系统性的自身免疫性疾病,其主要的病理学特征为关节滑膜炎症、滑膜细胞增生、血管翳形成以及软骨和骨组织的破坏。类风湿关节炎病变是一个持续、反复发作的过程,其不可治愈性令患者苦不堪言。目前RA的治疗方法主要有药物治疗及外科手术。临床上常用的药物包括非甾体类抗炎药物(nonsteroidal anti-inflammatory drugs,NSIADS)、糖皮质激素(glucocorticoids)、风湿药物(disease-modifiying antirheumatic drugs,DMADs)和生物制剂(TNF-α抑制剂,IL-Iβ受体阻断剂)等。NSIADS和糖皮质激素虽然可有效缓解关节炎症,但并不能阻止骨破坏进程;DMADs存在用药周期长,毒副作用大等问题;被认为治疗效果最好的生物制剂也仅对70%的RA患者有效,而且存在价格昂贵、抑制人体免疫反应等问题。因此寻求新的替代性药物仍然是RA药物治疗的的关键问题之一。中药尤其是结构明了的中药单体具有多靶点、毒副作用小和价格低廉等优点,成为RA替代性药物的重要来源。土贝母苷甲(Tubeimoside,TBMS 1)是一种从土贝母(Bolbostemma paniculatum,B.paniculatum)中提取的倍半萜皂苷,已有的研究表明该中药单体具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化和抗病毒等作用,而且我们实验室合作者西澳大学Jiake Xu实验室研究发现,土贝母苷甲能显著抑制破骨细胞的形成和骨吸收活性(尚未发表)。破骨细胞是RA骨破坏的主要受损细胞。鉴于此,我们猜想:TBMS I可能对RA的发病过程具有一定的抑制作用。为此,我们通过体内外实验分析了 TBMS I对RA的可能治疗作用,并进一步进行了机制探讨。主要实验内容和结果:第一部分:体外实验1)培养 CIA 大鼠滑膜成纤维细胞(fibroblast like synovial cells,FLS),MTS/PMS试验检测TBMSI的药物毒性;2)细胞划痕实验检测TBMS I对细胞的迁移水平的影响;3)EdU掺入实验检测TBMS I对RA滑膜细胞增殖的影响;4)RTPCR检测TBMS I对TNF-α诱导的FLS炎性因子表达水平的影响。5)检测TBMS I对MAPK信号通路的激活作用。结果:TBMS I在实验浓度(0μM、0.5μM、1.0μM、2.0μM、5μM)下对细胞没有毒性;并且在1μM时就开始明显抑制TNF-α诱导后的滑膜成纤维细胞的迁移;EdU掺入实验表明1μM的TBMS I能够明显抑制CIA大鼠滑膜细胞的增殖;TBMS I可显著下调TNF-α诱导的FLS细胞中炎性因子表达水平,并且能够下调MMP-9的表达。实验表明,TBMS I对炎性因子的下调作用可能通过激活JNK和p38信号通路来实现。第二部分:体内实验购买SPF级160g-180g雌性wistar大鼠37只,分别于皮内和皮下两次注射II型胶原与完全弗氏佐剂乳化剂,建立胶原诱导性关节炎(Collagen induced arthritis,CIA)模型,正常对照组(Control)同法注射生理盐水。在大鼠CIA确立时(关节炎指数评分≥2分),随机将CIA大鼠分为4组:①CIA对照组(CIA+Vehicle):腹腔注射生理盐水;②低剂量药物组(CIA+TBMS I 1mg/kg):腹腔注射1mg/kg TBMS I;③中剂量药物组(CIA+TBMS I 5mg/kg):腹腔注射5mg/kg TBMS I;④高剂量药物组(CIA+TBMS I 10mg/kg):腹腔注射 10mg/kg TBMS I。每天注射一次,持续 14 天。通过关节炎指数评分、足爪体积测量、血清炎性因子检测、X-光摄片和病理学切片等分析TBMS I对CIA大鼠发病的可能抑制作用。结果:TBMS I低剂量组不能明显改善CIA大鼠的发病严重程度。但是,TBMS I中剂量组和高剂量组可剂量依赖性减轻CIA大鼠的关节红肿程度,下调血清TNF-α和IL-1β的水平;病理学切片和X-光摄片显示腹腔给予5mg/(kg.d)和10 mg/(kg.d)的TBMS I可剂量依赖性减轻关节滑膜炎症,抑制滑膜组织的增生和血管翳的形成,同时软骨和骨组织破坏程度显著降低。结论:细胞水平和动物水平实验表明,TBMS I对类风湿关节炎具有治疗作用,该治疗作用通过减轻炎症、抑制滑膜细胞增生和迁移,以及降低骨组织破坏程度等方面来实现。