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急性脑卒中是老年人首位的致残原因,而缺血性脑卒中的发病率较出血性脑卒中的两倍还高,因此缺血性脑卒中的治疗倍受关注。缺血性脑卒中治疗的关键是在早期治疗,早期治疗主要包括溶栓治疗和神经保护治疗(神经保护剂和亚低温治疗)。介入技术的发展和溶栓剂的进步,尤其是rt-PA的应用充分显示了在溶栓时间窗内使用可以显著减轻神经功能障碍。溶栓剂能够加快血管再通,从而挽救缺血脑组织中尚处于可逆阶段而濒死的神经细胞。然而,溶栓的时间窗很窄,禁忌症较多,要求条件较高,患者往往就诊时缺血时间已较长,况且溶栓后血管再通继发的再灌注损伤会加重脑水肿的形成和出血的可能,脑缺血后神经元损伤,以及继发的病理生理变化,如钙超载、生成大量的氧自由基和NO、神经元凋亡和生物膜的破坏及炎症反应等,这些因素又进一步加重脑损害。目前临床使用的神经保护剂的使用界果也都不很令人满意。
基于上述原因,脑缺血后的神经保护在卒中治疗中是一个极为重要的课题。为了促进大脑功能恢复和减少神经系统的后遗症,亚低温治疗越来越受到重视。亚低温治疗可以在相当程度上阻断这种恶性循环,起到神经保护作用。
目的:
通过建立改良的永久性MCAO动物模型,研究缺血后在不同延迟时间点予以亚低温治疗对大鼠永久性MCAO的神经保护效应及其对神经元凋亡的影响。
方法:
30只SD雄性大鼠随机分为3组,每组10只,分别为A组 (MCAO 2h后予以33±0.5℃亚低温22h)、B组(MCAO 6h后予以33±1℃亚低温18h)和C组(MCAO常温对照组)。建立改良的永久性MCAO大鼠模型,均在MCAO后24h处死。A组和B组动物分别在MCAO后2h和6h时开始全身亚低温处理,持续监测直肠温度,维持在33±0.5℃。各组动物在MCAO后24h进行Longa评分,随即经心脏灌流,取脑组织,又经4%多聚甲醛固定后,依次经过20%和130%的蔗糖溶液脱水制冰冻切片,切片保存在原位杂交保护液中。用CV染色分析脑梗塞灶体积占全脑的百分比,采用体积比法计算脑水肿程度。取经过前联合冠状位的切片进行TUNEL染色,比较亚低温组与对照组细胞凋亡情况,研究亚低温对缺血半暗带内神经元凋亡的影响。
结果:
常温对照组有2只大鼠在MCAO后24h时处于昏迷状态,3只大鼠分别于MCAO后第14、16和17h死亡,死亡率为30%。亚低温组A组和B组的大鼠在MCAO后24h全部存活,死亡率为0,B组有1只大鼠在MCAO后24h时处于昏迷状态。
与对照组相比较,A组和B组梗死灶体积占全脑体积的百分比、脑水肿程度和Longa评分均明显降低,有统计学意义。在缺血半暗带内大脑皮质区、纹状体区和丘脑区TUNEL染色凋亡细胞计数A组和B组也均明显少于对照组,有统计学意义。
比较A组与B组,梗死灶体积占全脑体积的百分比A组明显小于B组(P<0.05);脑水肿程度A组低于B组,差别有统计学意义; Longa评分A组小于B组,但差异无统计学意义;大脑皮质区、纹状体区TUNEL染色凋亡细胞计数A组都少于B组,统计学上具有显著差异,但丘脑区两组差别没有统计学意义。
结论:
1、 MCAO后2h后33℃22h的亚低温治疗和MCAO后6h后33℃18h的亚低温治疗都有神经保护作用;
2、脑缺血后亚低温治疗越早效果越明显;
3、延长亚低温治疗时间可以使在缺血后6h开始的亚低温治疗对pMCAO大鼠仍有神经保护作用,超过以往报道的1h。