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目的:本研究希望通过在基因-蛋白-环境等多个层次的水平上,寻找调控低密度脂蛋白受体（LDLR）的相关基因和新的突变位点,并研究这些新的基因和突变位点是如何参与调控胆固醇代谢的。通过对这些基因调控胆固醇的分子机制和功能的研究,寻找出新的降血脂药物的作用靶点,为降低血脂异常发病率和冠心病发病率提供理论依据和实验基础:1)选取新疆汉族、维吾尔族和哈萨克族的健康人群,利用全外显子组基因二代测序技术,对候选的胆固醇代谢调控基因进行检测,寻找能够影响血脂代谢的新的突变位点;2)对筛查出的DAB2基因新的突变位点进行研究,探讨DAB2参与调控胆固醇吸收代谢过程的分子机制;3)选取DAB2基因的标签SNPs,分析其在新疆汉族、维吾尔族冠心病和健康人群中的基因型和等位基因型分布频率,研究这些SNPs与冠心病发病危险因素的相互作用。方法:1)选取新疆地区民族、性别和年龄相匹配的普通人群,根据低密度脂蛋白胆固醇的参考范围,分为低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）高值组和低值组,通过查阅文献,对有可能参与胆固醇代谢调控过程的32条候选基因（635个片段）,进行全外显子组基因二代测序,分析这些基因突变位点和血脂的相关性;2)利用CRISPR/Cas9技术构建ARH-KO细胞系,对DAB2基因8个新发现的突变位点构建真核过表达质粒,利用蛋白质免疫印迹、实时荧光定量PCR、免疫共沉淀等分子生物学相关技术,研究这些新的突变位点对靶蛋白LDLR功能的影响,并探讨其中可能的分子机制与功能特点;3)选择经冠状动脉造影检查确诊冠心病的患者1016名和健康对照组967名,两组人群年龄、性别和民族匹配,利用多重连接酶检测反应方法（improved multiplex ligase detection reaction method i MLDR）进行SNP基因分型,分析基因型、等位基因频率与冠心病发病率之间的相关性。结果:1)本研究选取长期居住在新疆的汉族、维吾尔族及哈萨克族人群共500人,根据LDL-C的参考范围,分为低值组和高值组,对已知可能参与胆固醇代谢吸收、内源性合成、分泌及后调节过程的32个候选基因（635个片段）,进行全外显子区二代测序,结果提示NPC1L1,DAB2,LDLR,SREBP1,SREBP2,SCAP,Numb,MBTPS1,FLOT2等基因的变异体同时出现在三个民族人群中,同时与汉族人群相比,NPC1L1,SCAP,DENND4C等基因的变异体在维吾尔族及哈萨克族人群中出现的频率较高。AMFR,Insig1,MYLIP9,TBL2等基因的突变主要出现在维吾尔族和哈萨克族人群中。部分基因只在某一个民族的人群中检测出来,如FBXW7、GRINA、Insig2等。胆固醇吸收关键调控基因DAB2共检测出来8个新的突变位点,分别是N226S,R296C,T505I,D211Y,F702C,H425R,Q212E,V544I;2)通过ARH-KO的SV589细胞系,在细胞水平上进行机制研究的结果显示:DAB2基因第544位的缬氨酸突变成了异亮氨酸,突变后,V544I突变体的蛋白水平不稳定,半衰期缩短,降解加速,蛋白表达量减少,导致靶蛋白LDLR介导LDL-C的内吞清除能力减弱,使得血浆中LDL-C的水平升高,这与我们从LDL-C的高值组中筛选出这一突变体的情况相符;3)在汉族冠心病人群中,SNP位点rs2855512的基因型频率、显性模型以及等位基因频率的分布,与对照组相比有显著差异（分别为P=0.015,P=0.010和P=0.006）。SNP位点rs2255280基因型频率、显性模型、隐性模型以及等位基因频率的分布,与对照组相比有显著差异（分别为P=0.026,P=0.022,P=0.047和P=0.011）。rs2855512和rs2255280的显性模型与冠心病的发生具有相关性（P=0.008,OR=1.439,95%CI:1.101～1.88;P=0.011,OR=1.416,95%CI:1.083）,携带AA基因型者冠心病的风险可能增加。对于维吾尔族群体,4个SNPs的基因模型分析在冠心病组和对照组中,差异无统计学意义。结论:1)本研究通过全基因外显子组二代测序技术,对可能参与胆固醇吸收后代谢过程进行调控的32条候选基因进行测序后发现,这些基因及其新突变位点在汉族、维吾尔族及哈萨克族三个人群中的分布存在差异性;参与胆固醇吸收后调控的基因DAB2、NPC1L1和LDLR等基因的新突变位点同时出现在三个民族人群中;2)通过在细胞水平上对DAB2基因的新突变位点V544I进行机制研究后发现:当DAB2基因发生V544I突变后,蛋白的表达水平明显下降,但是m RNA水平没有变化,因此这个新的突变位点是通过转录后机制,对LDLR介导的LDL-C内吞清除过程进行调控,进而影响了血浆LDL-C的水平,使血浆中LDL-C的水平升高,免疫共沉淀结果也证实DAB2发生V544I突变后,导致DAB2蛋白与LDLR的结合变少,LDLR的内吞功能受到损害,这与此突变体在LDL-C高值组中被发现的情况一致;3)DAB2基因rs2855512和rs2255280位点的多态性与新疆汉族人群冠心病的发生具有相关性,携带AA基因型的人群可能患冠心病发病的风险增加,A等位基因可能是新疆汉族冠心病人群的一个危险因素。