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中国已于1999年进入老龄化社会,老年人口的增长,致使一系列老年病如缺血性脑血管意外逐年增多。此类疾病发病率、致残率、死亡率和复发率均很高,成为严重危害着人类生命健康的三大主要疾病之一,给家庭、社会带来沉重的负累。脑微血管在维持神经元的稳定方面起重要作用：脑缺血性损伤时,随缺血时间的延长,微血管的数量逐渐增加。研究表明缺血半暗带血管微密度增加的患者存活率高,故缺血后血管再生的情况与脑血管病的进展转归关系密切,故研究急性脑损伤后血管再生也成为重点所在。粒细胞集落刺激因子(Granulocyte Colony Stimulating Factor, G-CSF)是由Metcalf等科学家于1980年第一次发现的一种存在于人体内的多肽链的细胞生长因子,具有特异性调节粒细胞的增殖与分化,增强粒细胞功能及对机体防御应激功能。G-CSF-R存在于神经元和胶质细胞,这提示G-CSF在在神经系统的损伤修复方面起着一定的保护机制作用,故其在神经修复与再生,神经系统受损保护领域受到越来越广泛的关注,其作用于神经系统的主要机制有抗神经元细胞凋亡、促进内源性骨髓干细胞迁徙至受损部位,与特定的内因子共同作用下进行增殖,分化为新生的神经元细胞、拮抗炎症反应、阻断兴奋性氨基酸毒性以及促进血管生成等。血管新生是以出芽方式在原有血管基础上形成新的毛细血管的过程,其核心是血管内皮细胞的分裂增殖。Survivin可调控Caspase-3等凋亡因子的表达,是重要的抗凋亡因子,近来血管平滑肌上,体外立体管腔内皮细胞和体内新生毛细血管上均发现Survivin强烈表达,抑制Survivin的表达可抑制血管生成,强制表达则促血管内皮发生,提示其在新生血管形成的过程中发挥着重要的作用。Egr.1的功能主要表现在参与细胞内信号转导及调控多种基因的表达,包括生长因子基因、信号传导基因、转录因子基因和癌基因等,对细胞生长、发育、分化和损伤修复起重要作用,也可调控促血管形成因子,促进血管生成。Survivin发挥促进这些因子的表达及分泌的功能时,需要转录因子Egr-1的参与,同时survivn又可在一定范围影响Egr-1的表达和作用。本实验通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤MCAO模型,观察大鼠脑缺血再灌注后额叶、颞叶缺血半暗带Egr-1、Survivin和微血管生成的变化,分析Egr-1与Survivin、之间可能存在的相关关系；以及重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human Granulocyte Colony Stimulating Factor, G-CSF)对前述二者的影响,探讨重组人粒细胞集落刺激因子在神经保护方而的可能机制,以期为rhG-CSF临床治疗缺血性脑血管病提供理论依据。实验动物分组和给药方法2-3月龄,质量280-320g封闭群健康雄性清洁级Sprague-Dawley (SD)大鼠72只,由河南省实验动物中心提供。将参与实验SD大鼠参照统计学方法随机选入假手术组(A),缺血再灌注损伤+生理盐水对照组(模型组)(B)与缺血再灌注损伤+G-CSF给药组(治疗组)(C)(n=24),各组根据处死时间不等又分为7d组,14d组和21d组,每亚组入选8只。入选治疗组大鼠自2h后自腹部皮下注射G-CSF50μg/(kg·d),单次注射量7.5m1,连续用药。MCAO模型制备、标本检测采用改良的Longa线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,在处理后的不同时间点处死大鼠,取脑组织常规固定、脱水、石蜡包埋、制成切片。采用SP法进行免疫组化染色,观察各组Survivin、Egr-1与CD31指示的缺血半暗带微血管表达的变化。应用图像分析系统测量阳性区积分光密度值。统计学方法采用SPSS17.0进行统计分析,组间阳性细胞数的比较用单因素方差分析及LSD-t检验,不同时间点间阳性细胞数的比较采用成组设计资料的t检验,检验水准a=0.05,双指标相关性采用pearson相关系数进行检验。结果Surviving表达局灶性缺血再灌注后Survivin阳性细胞于假手术组数量稀少,排列稀疏,染色浅淡,模型组及治疗组表达阳性细胞明显增多,主要表达在神经元、少突胶质细胞、星形胶质细胞的胞浆,有少数胞核也有表达,特别是血管增生活跃部分阳性细胞明显增加,模型组各时间点Survivin均较假手术组明显增加,差异有统计学意义(p<0.05),治疗组再灌注14d时达高峰,7d,14天时间点Survivin表达均较模型组明显增加,差异有统计学意义(p<0.05),21d时与模型组无显著差异(p>0.05)。Egr-1表达局灶性缺血再灌注后Egr-1阳性细胞于假手术组数量稀少,且染色浅淡。模型组及治疗组表达阳性细胞明显增多,染色较强.由细胞核逐渐至胞浆表达.模型组各时间点Egr-1均较假手术组明显增加,差异有统计学意义(p<0.05)。治疗组再灌注14d时达高峰,7d,14天时间点Egr-1表达均较模型组明显增加,差异有统计学意义(p<0.05),21d时与模型组无显著差异(p>0.05)。模型组Survivin与Egr-1的相关性分析Survivin与Egr-1的表达正相关r=0.314,P<0.05结论1.大鼠缺血再灌注损伤能上调Survivin与Egr-1的表达,且二者表达呈正相关。2. rhG-CSF干预可显著上调Survivin与Egr-1的表达,加速毛细血管生成,提示rhG-CSF可通过促进损伤区毛细血管生成起到脑保护作用