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第一部分：PDE4D在胃癌中的表达情况及其同胃癌患者临床预后的关系 目的:研究PDE4D在胃癌组织中的表达情况，以及PDE4D表达同胃癌患者生存、预后之间的关系，寻找新的胃癌早期诊断和判断预后的分子标志物。 方法: 1.逆转录实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测胃癌组织和相应癌旁组织中PDE4D基因的mRNA表达情况； 2.蛋白免疫印迹法（Westernblot）法检测成对胃癌组织中PDE4D蛋白的表达情况； 3.免疫组织化学染色法（IHC）检测PDE4D编码的蛋白在胃癌病理切片中的表达情况，结合临床预后资料，运用SPSS22.0软件分析，采取相关性分析,单因素、多因素COX回归分析等方法，研究PDE4D的表达与胃癌临床及病理学性质同胃癌患者预后之间的关系。 结果: 1.PDE4D基因在胃癌组织中的表达在转录以及翻译水平都显著高于其相对应的癌旁组织； 2.应用免疫组织化学染色法对150例确诊胃癌的患者的石蜡病理切片进行染色分析，统计结果表明，胃癌中PDE4D的表达水平与胃癌患者的肿瘤浸润深度（P=0.001），T分期（P=0.045），TNM分期（P=0.004)，远处转移（P=0.002）呈正相关； 3.通过生存分析发现，PDE4D高表达组患者平均生存时间（39.5±4.3月，N=105），低表达组平均生存时间（97.8±6.8月，N=45），高表达组生存时间明显低于低表达组患者，(P＜0.001)； 4.多因素COX回归分析显示PDE4D表达水平、性别、肿瘤部位、肿瘤N分期、肝转移是影响胃癌患者预后的独立危险因素。 结论: 1．在同一胃癌患者癌组织中，PDE4D在转录和翻译水平的表达都明显高于其相应的癌旁组织； 2．PDE4D的高表达与胃癌患者的肿瘤浸润深度、临床病理分期（TNM）、肿瘤的T分期以及远处转移情况相关； 3．PDE4D基因表达水平、性别、肿瘤部位、肿瘤N分期、肝转移等因素均为胃癌患者生存预后的独立影响因素； 4．PDE4D有成为评估胃癌患者预后的生物标志物的潜能； 第二部分：靶向沉默PDE4D基因对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响 目的:应用小干扰RNA靶向沉默胃癌MGC-803、SGC-7901细胞中PDE4D的表达，研究PDE4D敲低后对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。 方法: 1.RT-qPCR、Westernblot检测PDE4D在人正常胃粘膜细胞系和胃癌细胞系中的表达水平； 2.人工化学合成PDE4DsiRNA及其空载的对照siRNA，并分别转染人胃癌MGC-803、SGC-7901细胞，RT-qPCR、Westernblot法分别检测转染后的细胞中PDE4D在mRNA及蛋白水平表达的变化。 3.CCK-8法及平板克隆法检测敲低PDE4D表达对人胃癌MGC-803、SGC-7901细胞增殖能力的影响。 4.Transwell迁移和侵袭实验检测敲低PDE4D表达后，对人胃癌MGC-803、SGC-7901细胞迁移、侵袭能力的影响。 结果: 1.人胃癌细胞株MGC-803、BGC-823、SGC-7901中PDE4D在mRNA及蛋白水平的表达显著高于正常胃粘膜细胞株GES-1； 2.PDE4DsiRNA转染人胃癌MGC-803、SGC-7901细胞后，PDE4D在mRNA及蛋白水平的表达明显下调； 3.MGC-803、SGC-7901细胞在转染PDE4DsiRNA后，转染组（Si组）细胞的增殖能力明显较对照组（NC组）降低； 4.MGC-803、SGC-7901细胞在转染PDE4DsiRNA后，转染组（Si组）细胞的迁移和侵袭能力明显较对照组（NC组）降低； 结论: 1.胃癌细胞株MGC-803、BGC-823、SGC-7901中PDE4D在mRNA及蛋白水平的表达明显高于永生化的正常胃粘膜细胞株（GES-1）； 2.小干扰RNA靶向沉默PDE4D基因，可显著降低PDE4D在胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901中在mRNA及蛋白水平的表达； 3.下调PDE4D基因的表达后，人胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901的增殖、迁移及侵袭能力明显降低。