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研究背景胃癌是世界上常见的消化道恶性肿瘤。目前治疗胃癌的主要方式为手术,化疗和放疗,但是其临床效果不尽人意,寻求更新的胃癌治疗手段特别是基因治疗势在必行。研究发现,c-Met基因在胃癌中表达较高。当c-Met蛋白与配体肝细胞生长因子(HGF)结合后,激活下游PI3K/Akt信号通路,可以强烈的刺激肿瘤细胞增生、浸润、侵袭、转移和血管再生。RNA干扰技术能特异性的沉默目的基因,目前已经成为肿瘤基因治疗的研究热点。本试验应用RNA干扰技术,沉默胃癌MKN-45细胞的c-Met基因,从基因和蛋白两个水平观察转染前后胃癌MKN-45细胞c-Met及其下游PI3K/Akt信号分子表达的变化,为胃癌的基因靶向治疗提供理论依据。材料和方法1、胃癌MKN-45细胞由中南大学湘雅医院病理实验室赠予,将细胞放置于含有10%胎牛血清的DMEM完全培养基,并置于37℃、5%C02、湿度为80%的培养箱中培养。从Genebank基因数据库查得c-Met基因序列,设计并合成3条c-Met-siRNA序列,合成工作委托上海吉玛制药技术有限公司完成。2、通过脂质体LipofectaminTM2000介导,将3条c-Met-siRNA序列转入人胃癌MKN-45细胞中。3、转染48h后,从基因和蛋白水平,利用实时定量PCR(real time-PCR, RT-PCR)方法和Western-Blot方法,检测转染前后胃癌MKN-45细胞c-Met及下游信号分子表达的变化。4、采用SPSS17.0统计软件包对数据进行分析,以P<0.05为有统计学意义。结果:1、RT-PCR方法检测转染后胃癌MKN-45细胞c-Met基因的表达较未转染组明显下降(P<0.05),而P13k基因和AKT基因的表达较未转染组无明显下降(P>0.05)。2、Western-Blot方法检测转染后胃癌MKN-45细胞c-Met蛋白、p-PI3k蛋白和p-AKT蛋白的表达较未转染组明显下降(P<0.05),而PI3k蛋白和AKT蛋白的表达较未转染组无明显下降(P>0.05)。结论:1、三条c-Met-siRNA有效地沉默胃癌MKN-45细胞c-Met基因,减少c-MetmRNA及c-Met蛋白的表达。2、沉默胃癌MKN-45细胞c-Met基因后,减少了下游PI3k/AKT信号通路磷酸化信号分子的数量,对非磷酸化分子的表达无明显的影响。