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脓毒症(Sepsis)是临床上多种严重疾病的并发症以及共同转归,同时还可以导致更为严重,死亡率更高的脓毒症性休克并最终导致患者死亡。虽然早期液体复苏和使用抗生素对于患者的救治起到了令人肯定的作用,但是脓毒症的生存率仍不理想。究其原因,感染的不断进展与恶化是脓毒症患者死亡的主要推动力量,尤其是对那些已经针对性的使用抗生素但病情仍进行性进展的患者来说,感染情况下机体免疫状态的研究就显得尤为重要。机体的免疫系统包括B细胞,T细胞等炎症细胞。辅助性T细胞1(Th1),辅助性T细胞2(Th2)是传统的T淋巴细胞亚群,它们的平衡状态直接影响着机体的免疫功能。现在,人们发现了另外两类新的辅助性T细胞亚群,即辅助性T细胞17(Th17)和CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)。Th17和Treg细胞都来源于初始T细胞,两者的功能和分化过程相互联系制约,是对Th1/Th2免疫平衡理论的重要补充。Treg细胞可以影响Th1/Th2/Th17细胞的极化,其特异性转录因子为叉头状转录因子3(Foxp3),Th17细胞分泌的特异性细胞因子白介素17(IL-17),其特异性转录因子为维甲酸孤儿核受体(ROR?t)。乌司他丁做为一种由人体肝脏分泌的蛋白酶抑制剂,是从健康成年男性尿液中提取的一种糖蛋白,对多种酶具有抑制作用。同时,其还可以调节多种致炎/抗炎细胞因子表达水平,例如降低肿瘤坏死因子-α(tnf-α)和il-6的分泌水平,并且可以提高b细胞的数量及功能。但是其对脓毒症中treg,th17这两种重要的cd4+t细胞的调节作用研究尚少。本研究的目的在于采用clp法复制脓毒症模型,用以探讨脓毒症大鼠体内th17细胞与treg细胞的动态变化以及各自对整体免疫状态的影响,同时探究乌司他丁对脓毒症大鼠th17细胞与treg细胞表达的干预效果及对机体整体免疫状态的影响。脓毒症动物模型的制备选用经典的盲肠结扎穿孔法(clp),选用健康雄性wistar大鼠32只,体重在250-300g之间,随机分为4组:(1)空白对照组(normalgroup);(2)假手术组(shamgroup);(3)盐水组(nsgroup):clp术后给予生理盐水10ml/kg腹腔注射;(4)乌司他丁治疗组(utigroup):clp术后给予乌司他丁10万u/kg腹腔注射,浓度为1万u/ml。各组术后在股部皮下注射生理盐水30ml/kg,补充术中丢失量和生理需要量。在实验结束之前,每只大鼠从腹主动脉取血5ml,然后处死,打开腹腔取出脾脏。利用流式细胞仪检测观察脾脏中th17,treg细胞占总淋巴细胞的比例及计算treg/th17的比值;采用rt-pcr检测th17和treg细胞的特异性转录因子ror?t和foxp3的mrna的表达情况;利用elisa检测血浆中il-17的分泌量;免疫组化法观察脾脏cd4+t细胞和cd8+t细胞的表达。流式细胞术结果显示:ns组treg细胞占全体淋巴细胞比例与normal,sham组相比有明显升高(p均<0.01),ns组th17细胞占全体淋巴细胞比例与normal,sham组相比有明显升高(p均<0.01)。uti组的treg细胞占全体淋巴细胞比例则相比于ns组有着显著的下降(p<0.01),uti组的th17细胞占全体淋巴细胞比例则相比于ns组有着显著的下降(p<0.01)。ns组treg/th17与normal,sham组treg/th17相比无明显差别(p均>0.05),uti组treg/th17则相比于normal,sham组均明显降低,差别具有统计学意义(p均<0.05);rt-pcr检测结果显示,ns组foxp3的mrna表达高于normal组、sham组和uti组(p均<0.01),而uti组foxp3mrna表达相比于normal,sham组无统计学意义(p均>0.05)。ns组ror?t的mrna表达高于normal组、sham组和uti组(p均<0.01),而uti组ror?t的mrna表达相比于normal,sham组无统计学意义(p均>0.05);elisa结果显示:ns组大鼠血浆中的il-17表达高于normal组、sham组和uti组(p均<0.05),而uti组il-17表达相比于normal,sham组无统计学意义(p均>0.05);免疫组化结果显示:在200倍的光镜下,ns组中代表cd4+t细胞的棕黄色颗粒相比于normal,sham组和uti组的棕黄色颗粒均减少;而normal,sham组和uti组各自的代表cd4+t细胞的棕黄色颗粒数量则无明显差异。在200倍的光镜下,normal,sham,ns组和uti组代表cd8+t细胞棕黄色颗粒数量均无明显差异。综上所述:脓毒症使机体处于一种免疫紊乱的状态,不仅存在着以Th17细胞增高为代表的促炎反应过程;同时存在着Treg细胞增多所介导的免疫抑制和CD4+T细胞的下降。乌司他丁通过其内源性的抗炎作用,缓解过度的炎症反应,减轻炎症性损害,提高CD4+T细胞的数量,改善免疫紊乱的状态。