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背景:性发育异常（disorders of sex development,DSD）是染色体核型、性腺表型以及性腺解剖结构不一致的一大类遗传异质性疾病的总称。据报道,在活产婴儿中,生殖器模糊患儿的患病率接近1:1000。在46,XY DSD病例中,高达70%患者缺乏准确的临床诊断。在46,XY DSD病例中,约8-15%是由NR5A1基因的变异引起的。携带相同NR5A1基因变异的不同患者具有不同的临床表型,病情严重程度不尽一致,很难确定基因型与表型的相关性。对象与方法:本研究以59个无AR、SRD5A2基因变异的46,XY DSD家系,共计62个患者作为研究对象。（1）靶向性捕获高通量测序检测164个性发育疾病致病基因。经千人基因组数据库,GnomAD数据库,ESP6500数据库,ExAC数据库和内部数据库对变异进行过滤,获得候选致病突变位点。重点关注NR5A1基因,Sanger测序对获得的NR5A1基因候选致病变异位点进行家系验证;（2）运用SIFT,Polyphen2,Mutation Taster,SWISS-MODEL软件等生物信息学方法分析NR5A1基因变异位点的氨基酸保守性,对蛋白质结构及蛋白质功能的影响;（3）构建NR5A1基因野生型与突变型质粒进行体外细胞学功能研究。Western Blot实验研究NR5A1基因变异对蛋白表达的影响,ICC实验研究NR5A1基因变异对蛋白定位的影响,TESCO荧光素酶检测实验研究NR5A1基因变异对转录活性的影响。结果:（1）59个无AR、SRD5A2基因变异的46,XY DSD家系中,共计14个家系中鉴定出14个NR5A1基因突变,包括8个杂合错义突变;2个杂合移码突变;2个杂合无义突变;1个杂合非移码缺失插入突变和1个纯合错义突变。NR5A1基因突变检出率为23.72%（14/59）。（2）Western Blot实验显示,与转染野生型NR5A1基因质粒比较,转染NR5A1基因p.Arg69Gly,p.Thr48Pro,p.Gly26Arg,p.Cys55Gly,p.Arg69His,p.Ala340Thr和p.LysVal1920delinsLeu突变质粒HEK293T细胞的SF1蛋白表达量显著降低;转染NR5A1基因p.Gly328Arg,p.Asp293Asn和p.Leu325Pro突变质粒HEK293T细胞的SF1蛋白表达量无显著变化;转染NR5A1基因p.Ser342X,p.Gln299Argfs*35,p.Cys412X和p.Leu361Profs*25突变质粒细胞中形成SF1截短蛋白。（3）ICC实验结果显示,NR5A1基因p.Arg69His,p.Ser342X,p.Gln299Argfs*35,p.Cys412X,p.Leu361Profs*25和p.Gly26Arg突变蛋白不仅在细胞核中表达,在细胞质中也有表达。NR5A1基因其他突变蛋白主要在细胞核表达。（4）TESCO荧光素酶检测实验显示,与单独转染野生型NR5A1质粒、或与SRY、SOX9质粒共转染比较,转染NR5A1基因p.LysVal1920delinsLeu,p.Thr48Pro,p.Cys55Gly,p.Arg69Gly,p.Gln299Arfs*35,p.Leu325Pro,p.Ser342X,p.Gly26Arg,p.Arg69His,p.Cys412X和p.Leu361Profs*25突变质粒的荧光素酶相对活性显著降低（P<0.0001）;其他突变质粒荧光素酶相对活性无显著变化（P>0.05）。结论:（1）14个家系中鉴定出NR5A1基因14个变异位点,其中9个变异位点致病性未报道过。NR5A1基因突变检出率为23.72%;（2）体外细胞功能实验显示,14个NR5A1变异位点中,p.LysVal1920delinsLeu,p.Thr48Pro,p.Cys55Gly,p.Arg69Gly,p.Gln299Arfs*35,p.Leu325Pro,p.Ser342X,p.Gly26Arg,p.Arg69His,p.Cys412X,p.Leu361Profs*25和p.Ala340Thr等12个位点影响了蛋白功能;没有发现p.Asp293Asn和p.Gly328Arg位点对蛋白功能产生影响。