【摘 要】
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从猪的肝脏组织中提取基因组DNA，用长链PCR的方法扩增得到猪的干扰素-γ基因，经测序表明其与GenBank中发表的猪干扰素-γ基因序列的同源性为99％左右。将其纯化后克隆到真核表达
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从猪的肝脏组织中提取基因组DNA，用长链PCR的方法扩增得到猪的干扰素-γ基因，经测序表明其与GenBank中发表的猪干扰素-γ基因序列的同源性为99％左右。将其纯化后克隆到真核表达载体PCI-neo载体中，组装成了真核表达载体PCI-neo-PoIFNγ。利用脂质体转染法将重组载体PCI-neo-PoIFNγ转染入仓鼠卵巢细胞(CHO)中，在G418的存在下进行筛选培养，获得了能表达猪干扰素-γ的转染细胞系。 收集转染细胞，用UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取总RNA，并通过RT-PCR的方法扩增获得猪干扰素-γ cDNA基因，这也从另一途径证实了猪干扰素-γ基因已成功地整合到细胞染色体中并能正确的转录出其mRNA。将获得的猪干扰素-γ cDNA基因克隆入原核表达载体pBV220中，组装成了原核表达载体pBV220-cPoIFNγ，经正反测序表明其与GenBank中发表的猪干扰素-γ cDNA序列完全相同。将这个表达载体转化入大肠杆菌表达菌株DH5α和BL21中，温度诱导培养后，经SDS-PAGE和Western实验检测可知特异表达带约在17KD的位置，并证实在菌株DH5α和BL21中的表达量没有明显的差异，其表达量都约占细菌总蛋白的15％左右。
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