鸭MyoG、MRF4基因的克隆及其在骨骼肌组织中的发育表达研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:JEEFHARDY
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MyoG和MRF4基因是MyoD(Myogenic determination gene)家族中两成员,它们在胚胎形成后期的肌纤维分化中起重要作用。其中MyoG主要在控制成肌细胞的融合中起作用,而MRF4则可能在肌纤维的形成中起关键作用。本研究从14d鸭胚胸肌组织中提取总RNA,克隆鸭MyoG、MRF4基因的CDS全序列;并采用实时荧光定量PCR的方法检测胚胎发育不同时期胸肌和腿肌中两基因的表达规律;再结合相应时期的胸肌、腿肌组织切片观察,进行胚胎肌肉发育模式的分析。结果表明:1、克隆得到鸭MyoG和MRF4基因的CDS全序列,长度分别为684bp和723bp,分别编码227和240个氨基酸。鸭MyoG基因的核苷酸、氨基酸序列与鸡的同源性分别为90.9%和92.1%;与其他物种间的同源性也较高。鸭MRF4与鸡的同源性分别为92.0%和93.8%,与其他物种的同源性均在60%以上。2、鸭MyoG和MRF4基因均包含有bHLH结构域,其与哺乳动物间的同源性均为100%,但与斑马鱼相比有一定变异,分别存在2个和6个变异位点;MyoG和MRF4基因的bHLH结构域间存在7个氨基酸位点的变异。3、鸭MyoG和MRF4基因均含有α-螺旋、延伸片段和无规卷曲三种二级结构。其中无规卷曲在两者中所占比例最高(65%左右),其次为α-螺旋(约30%),最少的是延伸片段(小于5%)。MyoG基因的肽链存在10个磷酸化位点,分别是Ser(7)、Thr(2)和Tyr(1);MRF4则有21个磷酸化位点,分别是Ser(18)、Thr(3)和Tyr(0);磷酸化位点大多分布在肽链两端。4、荧光定量PCR检测出MyoG和MRF4基因在鸭胚10d、14d、18d、22d、27d和出壳后7d的胸肌、腿肌组织中均有不同程度的表达。腿肌组织中,MyoG和MRF4mRNA水平达到高峰的时间分别为14d和18d,均在27d达到最低,出壳后7d又升高;胸肌中两基因的表达均在14d达到高峰,随后呈现下降的趋势,MyoG mRNA水平在27d明显低于出壳后7d。5、MyoG基因在14d的胸肌、腿肌中均达到高峰,在27d表达量最低;在胚胎发育阶段MyoG在胸肌中的表达量高于腿肌,出壳后却明显低于腿肌组织中的表达量。MRF4 mRNA在胸肌14d、腿肌18d达到表达高峰,随后又表现出不同程度的下降趋势;MRF4基因在胸肌组织中各时期的表达量均明显高于腿肌组织。6、从胸肌、腿肌组织切片可见,腿肌中肌管开始分化形成肌纤维的时间比胸嫉脑纭
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