论文部分内容阅读
研究背景:斑秃的发生与多方面因素有关,包括遗传、免疫、精神心理应激以及部分营养元素含量异常等,其中,以毛囊为特异性组织的自身免疫反应是比较公认的机制,多项研究显示急性期斑秃患者毛囊周围存在淋巴细胞浸润,以CD4+T细胞为主,此外,Notch信号通络部分蛋白、Th17、Treg细胞分别被研究发现与斑秃有一定关联,但具体联系尚不明确,有待于进一步研究探讨。研究目的:探讨斑秃皮损区Notch通路部分蛋白、Th17和Treg细胞表达是否有异常,异常的指标之间有何联系,与严重程度及病程有何关系。研究方法:第一部分:选用13例斑秃患者皮损和12例正常人头皮,对标本进行PCR、免疫组化染色检测。PCR 检测指标为 Notch 1、Notch 4、Delta 4、Jagged 1、ROR-yt、Foxp3 mRNA表达,用2-△ct值表示表达量;免疫组化染色分别标记CD3+、CD4+、CD8+、IL-17+、Foxp3+细胞和Notch1、Notch 4、Jagged 1蛋白,结果用Image Pro Plus软件计算染色图片的IOD值,用SPSS20.0进行统计分析。第二部分:将18只C3H/HeJ小鼠随机均分为造模组和空白组,造模方法为慢性应激刺激,具体途径包括夹尾、湿笼、行为束缚等。造模成功后分别取造模组皮损区和空白组小鼠相应部位皮肤进行PCR检测,检测内容及统计分析方法同第一部分。结果:第一部分:急慢性斑秃患者皮损区毛囊周围CD3+、CD4+、IL-17+细胞均比正常人明显增多(P<0.05),Foxp3+细胞却比正常人显著降低(P<0.05),CD8+细胞在患者和正常人之间无显著差异(P>0.05),这五种抗体标记的细胞在急慢性斑秃患者之间均无显著差异(P>0.05),与斑秃的严重程度无显著相关性(P>0.05),在毛囊不同部位(上/下段)的浸润亦无显著差异(P>0.05)。Jagged1配体蛋白在急性斑秃患者中的表达显著低于正常人,其中毛囊不同部位(上/下段)的表达无差异,而该蛋白的mRNA表达量在急慢性斑秃患者和正常人之间无统计学差异(P>0.05);Notch4蛋白在急慢性斑秃患者的表达均无异于正常人,但其mRNA表达在急性斑秃患者的表达低于正常人(P<0.05);急慢性斑秃患者与正常人Delta4蛋白的表达与无显著差异(P>0.05),而mRNA的表达在急性斑秃患者中低于正常人(P<0.05);Notch1蛋白及其mRNA的表达在急性斑秃患者与正常人之间无显著差异(P>0.05)。异常表达的Jagged1蛋白和Notch4、Delta4 mRNA与斑秃严重程度无显著相关性。进一步探讨异常的Notch通路蛋白与Th17/Treg细胞浸润的相关性,发现异常表达的Jagged1蛋白和Notch4、Delta4 mRNA与相应的IL-17+、Foxp3+细胞的浸润无显著相关性。第二部分:对C3H/HeJ小鼠进行慢性应激刺激,8周后造模组小鼠均出现头部(包括胡须)、腹部、四肢近端、背部不同程度的脱毛;分别取模型组头部皮损处和空白组头部皮肤,经 PCR 方法检测 Notchl、Notch4、Delta4、Jagged1、ROR-γt、Foxp3 mRNA 在皮损区的表达,结果与空白组相比未见统计学差异(P>0.05)。结论:斑秃患者在皮损毛囊周围存在淋巴细胞浸润,以CD4+T细胞为主,且存在Th17/Treg细胞失衡即Th17细胞增多Treg细胞减少,在不同病程或毛囊不同部位这些细胞的浸润无差异。而Notch信号通路的4种相关蛋白,Jagged1蛋白在急性斑秃的发生中可能发挥作用,Notch4、Delta4蛋白mRNA在慢性斑秃的发展中有一定的影响。异常表达的Notch蛋白或mRNA与Th17、Treg细胞的浸润并没有相关性。Notch通路与斑秃发病以及Th17、Treg细胞表达的相关性有待进一步研究探讨。此外,慢性应激刺激对于C3H/HeJ小鼠是一种可行的AA造模方法,而Th17、Treg细胞、Notch信号通路部分蛋白并未参与小鼠应激反应后AA的发病。