【摘 要】
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环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)属真菌来源,是含11个氨基酸的环状多肽,具有较强的细胞免疫抑制作用,能有效地防止移植后的排斥反应,延长肾脏、肝脏、心脏等同种异体移植器官和
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环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)属真菌来源,是含11个氨基酸的环状多肽,具有较强的细胞免疫抑制作用,能有效地防止移植后的排斥反应,延长肾脏、肝脏、心脏等同种异体移植器官和组织的存活。同时,CsA及其代谢产物具有严重的毒副作用,主要是肾毒性和肝毒性等,故定期监测病人血液中CsA的浓度至关重要。SELEX技术即配体指数富集的系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX),是一种新型的体外筛选技术。适体(aptamer),又称适配分子或适配子,其实质是运用SELEX技术从人工体外合成的随机寡核苷酸序列库中反复筛选得到的能以极高的亲和力和特异性与靶分子结合的一段寡核苷酸序列。适体的功能类似于抗体但明显优于抗体,具有靶分子范围广泛、亲和力和特异性高、制备方便、稳定性好等优点,在临床治疗和诊断方法等方面都具有广阔的应用前景。本研究旨在运用SELEX技术从人工体外合成的随机ssDNA文库中筛选到针对CsA的特异性适体,为建立检测全血CsA浓度的快速而简便的实验室方法奠定基础。我们先将CsA共价结合到甲苯磺酰基活化磁珠上。体外合成一个全长78个核苷酸中间含35个随机序列的随机ssDNA文库,以连接在磁珠上的CsA为靶分子,通过BioMag- SELEX方法筛选CsA特异性适体,利用生物素-链亲和素-辣根过氧化物酶系统检测每轮ssDNA文库与CsA的亲和力,将最后一轮筛选产物克隆测序并运用相关软件进行适体序列一级结构和二级结构分析。经过10轮的筛选和扩增,得到了CsA特异性的适体,每轮ssDNA文库与CsA的亲和力呈上升趋势。19个克隆适体序列全长78 nt,根据一级结构序列的
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