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为了对牛早期胚胎的性别进行鉴定,本试验研究了活体采卵、体外受精和胚胎切割等技术。试验利用活体采卵技术对荷斯坦奶牛活体采卵,探讨影响活体采卵的因素对卵母细胞回收的影响。用激素处理不发情和发情母牛,探讨激素对卵母细胞回收的影响。试验还对发情牛血清和犊牛血清对牛卵母细胞成熟的影响以及在体外受精过程中囊胚率的影响进行了研究;同时对精子不同的处理方法和牛胚胎切割取样技术和胚胎发育时期进行了研究。最终用LAMP 法对牛早期胚胎进行了性别鉴定。 结果显示:活体采卵每周2 次与每周1 次两种处理每次可获得的卵母细胞数分别为5.0±0.5 枚和2.7±0.8 枚,差异极显著(P<0.01),说明在适当情况下每周2 次采卵可以充分利用母畜扩大卵母细胞来源,有利于商业化生产。用FSH 在采卵前3 天处理一组不发情母牛,另一组不用激素处理,发现两组每次获卵数分别为6.1±0.3枚和2.0±0.5枚,回收率分别为66%和32%,优质卵母细胞率分别为50%和28%,且差异显著(P<0.05)。 在体外受精试验中,添加ECS 和FCS 的M199 培养基中,分别有71.4%和60.9%的卵母细胞成熟率,74.7%和67.2%的卵裂率,23.2%和17.8%囊胚率,这说明不同的血清种类对卵母细胞成熟率、卵裂率和囊胚率差异显著(P<0.05);上浮法和percoll 法对体外受精卵裂率和囊胚率影响不同,分别获得57.0%、67.6%的卵裂率,17.6%、24.5%的囊胚率。这与Parrish等的结论不一致,是本试验percoll 法精子回收较好的原因。 徒手切割胚胎移植妊娠率与显微操作仪切割胚胎的妊娠率分别为40.7%和39.1%,差异不显著(P>0.05);取样方法及胚胎发育时期对移植妊娠率的影响均差异不显著,妊娠率分别为43.5%、43.7%、40.0%和43.5%,(P>0.05); 由此可以得出,胚胎经过正确的取样后,不会影响胚胎的继续发育,即使在体外环境下,也是如此。另外,透明带的有无对胚胎的继续发育也没有影响。 本试验对66 枚体外胚胎和111 枚体内胚胎进行了性别鉴定,对鉴定后的87 枚雌性胚胎进行移植,其中进行体外胚胎移植的除3 头流产且均为雌性,其余10 头都顺利产下母牛犊,这与性别鉴定的结果完全相符合;进行体内胚胎移植的20 头妊娠牛除4 头流产且均为雌性,其余16 头都顺利产下母牛犊,这与性别鉴定的结果完全相符合。PCR法扩增检测需要3h,而LAMP 法仅仅需要50min 扩增检测,扩增检测时间至少缩短了2h,大大提高了检测效率;同时,LAMP 法检测的准确率可以达到100%,优于PCR 法,所以,LAMP 法在胚胎性别鉴定中是可行的。与PCR 相比,更高效、简便。