【摘 要】
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基因治疗是一种新型治疗癌症的方法,但是缺乏安全高效的载体严重限制其应用。阳离子脂质体由于制备方法简单、毒性低,已成为一种应用广泛的非病毒基因载体。为探究不同尾部阳离子类脂对基因转运的影响,本论文在课题组已有的以C12:0和C14:0为尾部的阳离子类脂DCTA和TCTA的基础上,合成了三个不同尾链长度及不饱和度阳离子类脂HCTA、OCTA和UCTA(季铵盐头部、氨基甲酸酯键、丙三醇骨架以及C16:0
【基金项目】
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科技部(863计划2014AA020707); 国家自然科学基金委(自然科学基金项目21503035, 21176046); 中央高校自主科研基金项目(DC201502020205); 辽宁师范大学; 大连民族大学
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基因治疗是一种新型治疗癌症的方法,但是缺乏安全高效的载体严重限制其应用。阳离子脂质体由于制备方法简单、毒性低,已成为一种应用广泛的非病毒基因载体。为探究不同尾部阳离子类脂对基因转运的影响,本论文在课题组已有的以C12:0和C14:0为尾部的阳离子类脂DCTA和TCTA的基础上,合成了三个不同尾链长度及不饱和度阳离子类脂HCTA、OCTA和UCTA(季铵盐头部、氨基甲酸酯键、丙三醇骨架以及C16:0、C18:0和C18:1疏水尾部)。纯化后,通过质谱、红外、核磁氢谱、核磁碳谱、高效液相色谱等进行表征,确认其结构,纯度在95%以上。通过氮气吹膜与超声分散法的方法将所合成的不同尾部阳离子类脂制备成阳离子脂质体,利用激光粒度分析仪对其粒径大小和zeta电位进行研究,脂质体尺寸在149到336 nm范围内,电位处于55~68 mV之间。用琼脂糖凝胶延滞实验探究了不同尾部阳离子脂质体复合DNA的程度,实验结果证明,阳离子脂质体能够和DNA复合。链长度及不饱和度的差异,致使脂质体结合DNA能力有所差别,DCTA、TCTA和UCTA脂质体结合能力较强。当脂质体和DNA以不同比例复合,比例增大,其与DNA的复合程度随之增强。将所制备的不同尾部阳离子脂质体运输质粒DNA对宫颈癌细胞(Hela)、人喉癌细胞(Hep-2)和人大细胞肺癌细胞(NCI-H460)进行转染。结果表明,当脂质体复合DNA的比例为3/1时,阳离子脂质体获得了最佳的转染效率。由于尾部结构的不同DCTA、TCTA和UCTA显示了比较好的转染效率。DCTA和TCTA转染效率接近商品试剂Lipofectamine2000,同时UCTA转染性能优于商品试剂DOTAP。助类脂的加入量对转染效率存在影响,当制备的脂质体以阳离子类脂与DOPE的摩尔比为1/1时,此类载体转染效率较高。用MTT毒性评价法研究了在不同N/P 比条件下,不同尾部阳离子脂质体的加入对细胞产生的毒性,以商品试剂Lipofectamine2000和DOTAP作对比。结果表明,以该类阳离子脂质体作为运载基因的载体细胞存活率在80%左右,并且DCTA、TCTA和UCTA显示了比较低的毒性。
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