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为研究内分泌干扰物对鱼类下丘脑—垂体—性腺轴的影响,本研究首先用DES(0.1、1和10μg/L,暴露20d)对内分泌干扰研究的经典模式动物——斑马鱼(Danio rerio)雄性成鱼进行处理。组织学研究结果表明,DES能严重影响斑马鱼精子发生。同时,本研究克隆了斑马鱼与生殖细胞发育和减数分裂相关的vasa、dmc1的部分cDNA,对其组织和细胞表达模式进行了研究。结果表明,vasa仅表达于精巢的精原细胞、初级精母细胞和卵巢不同时期的生殖细胞;而 dmc1则表达于精巢精母细胞和卵巢卵母细胞发育早期。半定量 PCR结果表明,DES处理后vasa的表达没有明显变化;而dmc1的表达则被明显抑制,且呈时间依赖性和剂量依赖性效应;转录因子dmrt1和雄激素合成关键酶基因P45011β的表达也被显著抑制,而雌激素合成酶关键基因cyp19a的表达上调。因此推测,DES可能通过抑制dmc1的表达阻碍了减数分裂;并通过抑制dmrt1的表达诱导了斑马鱼生殖细胞凋亡,而P45011β的表达下调可能是间接原因。 随后,为研究乙炔基雌二醇(EE2)是否能影响雄性黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)垂体中促性腺激素3个亚基基因的表达,从而干扰FSH和LH的分泌,采用末端快速扩增(RACE)的方法在黄颡鱼垂体中克隆了促性腺激素的2个β亚基(FSHβ和LHβ)的全长cDNA,对其组织表达模式和雌雄性垂体中的季节表达模式进行了研究;另外,用100 ng/L的EE2对雄性黄颡鱼(2龄)进行了28天的暴露处理。结果发现,黄颡鱼FSHβcDNA全长528 bp,ORF为399 bp,编码132个氨基酸;LHβ全长为870 bp,ORF为417 bp,编码138个氨基酸。序列分析结果表明,黄颡鱼FSHβ含有一个17氨基酸的信号肽,2个保守的N—糖基化位点和13个半胱氨酸残基,而 LHβ含有一个18个氨基酸的信号肽,1个N—糖基化位点和12个半胱氨酸残基。进化分析显示,黄颡鱼FSHβ和LHβ与鲶形目的鱼类进化关系较近。组织分布结果发现,黄颡鱼3亚基均仅在垂体中表达。季节表达模式结果表明,雌雄黄颡鱼GtHα和LHβ表达水平在5月份左右达到最高,随后降低;FSHβ在雌性的表达模式与GtHα和LHβ相同,而在雄性, FSHβ的表达没有明显变化。半定量RT-PCR结果显示,100 ng/L的EE2能显著抑制黄颡鱼促性腺激素3个亚基基因的表达。因此,我们认为,EE2可能通过抑制黄颡鱼雄性垂体FSHβ和LHβ的表达,阻碍其正常的精子发生、精子成熟和排精过程,从而影响其正常的繁殖和发育。