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目的：通过对痰湿型多囊卵巢综合征患者、非痰湿型多囊卵巢综合征患者与因男方因素行IVF助孕的不孕患者的取卵日卵巢颗粒细胞进行甲基化位点检测，比较各组基因DNA甲基化的表达差异，并进行验证，寻找生物标志物，进行多囊卵巢综合征痰湿证候客观化的研究。
方法：选取采用体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的痰湿型多囊卵巢综合征患者（实验组）60例，非痰湿型多囊卵巢综合征患者（对照1组）59例，因男方因素行IVF助孕的不孕患者（对照2组）57例。三组患者均采用IVF标准长方案促排，取卵日留取卵泡液后分离颗粒细胞，冻存。观察三组患者的一般资料及获卵数、2PN受精率、可用胚胎率、OHSS发生率等数据。同时，对各组取卵日卵巢颗粒细胞进行甲基化芯片检测甲基化位点，获得正常患者、非痰湿型多囊卵巢综合征患者及痰湿型多囊卵巢综合征患者的基因组DNA甲基化表达谱，比较各组基因DNA甲基化的表达差异，并对筛选出具有代表性的差异基因进行验证，利用qPCR技术检测，验证三组患者卵巢颗粒细胞中候选差异基因是否存在表达差异。
结果：（一）临床数据分析显示：实验组BMI（27.52±2.95）高于对照1组（19.83±1.23）、对照2组（23.04±0.68）（P＜0.05）。与对照2组相比，实验组与对照1组FPG值均增高（P＜0.05），实验组与对照1组FIN、HOMA-IR值均增高（P＜0.01）；与对照1组相比，实验组FPG、FIN、HOMA-IR值均增高（P＜0.01）。实验组优质胚胎率较对照1组高、较对照2组低（P＜0.05）。实验组优质胚胎率（36.05%）低于对照2组（43.89%）（P＜0.05）。（二）测序结果显示：发现痰湿型PCOS不孕患者组与正常对照组颗粒细胞的8093个DMR的相关基因。其中涉及细胞组分有6206个，分子功能有720个，生物学过程有1164个。通过对其进行GO功能注释，主要与细胞发育、信号调节、代谢过程、防御反应等相关联；而通过KEGG通路分析，发现275个具有统计学意义的通路（P＜0.05），主要涉及甾体激素的合成、促性腺激素的调节、细胞增殖与凋亡、机体能量代谢等过程。其中，本研究重点关注了与卵源性相关因子（GREM2）、与能量代谢与平衡相关的基因（IRS1）、与细胞自噬相关的基因（ATG7）和与细胞凋亡相关基因（FOXO3a）。这些基因可能是痰湿型PCOS不孕患者月经失调、闭经、不孕、多毛等症状的DNA甲基化调控基因。
结论：卵巢颗粒细胞GREM2、IRS1、ATG7、FOXO3a基因异常甲基化可能与痰湿型PCOS不孕患者的证候表现具有相关性，它们作为PCOS痰湿证候生物标志物，为“痰湿致不孕”的表观遗传学证候本质研究提供了依据。
方法：选取采用体外受精-胚胎移植（IVF-ET）治疗的痰湿型多囊卵巢综合征患者（实验组）60例，非痰湿型多囊卵巢综合征患者（对照1组）59例，因男方因素行IVF助孕的不孕患者（对照2组）57例。三组患者均采用IVF标准长方案促排，取卵日留取卵泡液后分离颗粒细胞，冻存。观察三组患者的一般资料及获卵数、2PN受精率、可用胚胎率、OHSS发生率等数据。同时，对各组取卵日卵巢颗粒细胞进行甲基化芯片检测甲基化位点，获得正常患者、非痰湿型多囊卵巢综合征患者及痰湿型多囊卵巢综合征患者的基因组DNA甲基化表达谱，比较各组基因DNA甲基化的表达差异，并对筛选出具有代表性的差异基因进行验证，利用qPCR技术检测，验证三组患者卵巢颗粒细胞中候选差异基因是否存在表达差异。
结果：（一）临床数据分析显示：实验组BMI（27.52±2.95）高于对照1组（19.83±1.23）、对照2组（23.04±0.68）（P＜0.05）。与对照2组相比，实验组与对照1组FPG值均增高（P＜0.05），实验组与对照1组FIN、HOMA-IR值均增高（P＜0.01）；与对照1组相比，实验组FPG、FIN、HOMA-IR值均增高（P＜0.01）。实验组优质胚胎率较对照1组高、较对照2组低（P＜0.05）。实验组优质胚胎率（36.05%）低于对照2组（43.89%）（P＜0.05）。（二）测序结果显示：发现痰湿型PCOS不孕患者组与正常对照组颗粒细胞的8093个DMR的相关基因。其中涉及细胞组分有6206个，分子功能有720个，生物学过程有1164个。通过对其进行GO功能注释，主要与细胞发育、信号调节、代谢过程、防御反应等相关联；而通过KEGG通路分析，发现275个具有统计学意义的通路（P＜0.05），主要涉及甾体激素的合成、促性腺激素的调节、细胞增殖与凋亡、机体能量代谢等过程。其中，本研究重点关注了与卵源性相关因子（GREM2）、与能量代谢与平衡相关的基因（IRS1）、与细胞自噬相关的基因（ATG7）和与细胞凋亡相关基因（FOXO3a）。这些基因可能是痰湿型PCOS不孕患者月经失调、闭经、不孕、多毛等症状的DNA甲基化调控基因。
结论：卵巢颗粒细胞GREM2、IRS1、ATG7、FOXO3a基因异常甲基化可能与痰湿型PCOS不孕患者的证候表现具有相关性，它们作为PCOS痰湿证候生物标志物，为“痰湿致不孕”的表观遗传学证候本质研究提供了依据。