白针后海、后三里、大肠俞对便秘大鼠胃肠运动和5-HT通路的影响

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兽医针灸有两千多年的历史,是中华民族优秀的文化遗产。便秘是常见消化系统疾病,而针灸是治疗便秘的优势疗法。目前有大量穴位应用于临床治疗便秘,并且针灸对便秘的疗效已经得到证实,但是不同穴位机理研究还处于初期阶段。本试验选择洛哌丁胺诱导大鼠便秘,通过白针后海穴(GV-1)、后三里穴(ST-36)、大肠俞穴(BL-25)治疗,探讨三个穴位对洛哌丁胺诱导大鼠便秘的缓解机理,为针灸临床治疗动物便秘提供理论基础。将20只SPF级健康SD大鼠随机分成4组,对照组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、模型Ⅲ组。模型Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组大鼠1~13 d每日灌服洛哌丁胺混悬液(3 mg/kg/d、6 mg/kg/d、9mg/kg/d),对照组大鼠在同样条件下灌服等体积生理盐水。试验期间观察大鼠体征状况,统计体重、粪便含水量、首粒黑便时间、粪便粒数及20粒粪便长度。确定造模时间和剂量后,探索GV-1、ST-36、BL-25对便秘的治疗效果及作用机理,选取SPF级健康SD大鼠60只,随机分为6组。对照组(A组)、模型组(B组)、西药治疗组(C组)、GV-1组(D组)、ST-36组(E组)、BL-25组(F组)。除A组外,其余5组大鼠每只每天灌服3 mg/kg/d洛哌丁胺,建立便秘模型。5 d后,出现明显便秘症状确定造模成功。在继续应用洛哌丁胺的基础上,C组灌服莫沙必利1.38 mg/kg/d混悬液,D、E、F组分别针刺GV-1、ST-36、BL-25各30 min。连续治疗7 d,记录体重及便秘指标。治疗第8d,将各组大鼠麻醉后,采用BL-420F生物系统测定结肠肌电,测小肠推进率,心脏采血后颈椎脱臼处死,立即摘取结肠前段组织。检测血清及结肠中胃肠运动相关神经递质及5-HT通路上相关因子。针刺三个穴位结果表明,针刺GV-1血清中5-HT、SS含量分别下调6.19 ng/mL、6.17 pg/mL(P<0.01);显著上调结肠组织中5-HT3R、5-HT4R mRNA相对表达量;结肠TPH蛋白表达水平极显著下调,结肠SERT蛋白表达水平上调(P<0.01);结肠5-HT蛋白表达水平下调29.16%(P<0.01);加快结肠慢波的频率和加强振幅(P<0.05);改善肠道结构;改善胃肠动力。针刺双侧ST-36血清中5-HT、SS含量分别下调23.93%、13.46%;5-HT3R、5-HT4R mRNA相对表达量分别上调40.98%、65.52%(P<0.05);结肠中SERT蛋白表达水平上调50%(P<0.01);结肠5-HT蛋白表达水平显著下降;减轻肠道结构损伤,增加杯状细胞个数。针刺双侧BL-25血清中5-HT含量下调(P<0.05);血清中VIP、SP含量分别增加27.48%、22.75%(P<0.05或P<0.01);结肠中5-HT4R相对表达量增加37.93%;结肠中TPH蛋白表达水平下调55%,结肠SERT蛋白表达水平上调40%(P<0.01);下调结肠5-HT蛋白表达水平23.88%;加快慢波频率;改善肠道结构。结论:大鼠连续5天应用3 mg/kg/d洛哌丁胺可以获得稳定的便秘模型;GV-1、ST-36、BL-25均能够缓解便秘症状,但是缓解便秘机理不同;GV-1治疗便秘效果优于 ST-36 和 BL-25。
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