丝素蛋白(Silk fibroin,SF)具有良好的物理机械性能、透气透湿性、可降解性和生物相容性,在组织工程和生物医用材料领域有潜在的应用。本文借助漆酶(Laccase)催化丝素蛋白接枝壳寡糖(COS),制备得到SF-g-COS膜材料;通过己糖激酶(Hexokinase)催化SF-g-COS膜材料中的COS磷酸化,结合仿生矿化在磷酸化膜材料表面沉积羟基磷灰石(HAp),制备丝素基仿生矿化材料,拓宽丝素基生物材料的应用范畴。研究首先选用丝素中酪氨酸的模型物对羟基苯乙酰胺(PHAD),考察了漆酶催化PHAD的自聚以及接枝COS的反应效果,借助超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-TQD)、核磁共振氢谱(~1H-NMR)、傅立叶变换红外光谱(FT-IR)分析产物结构。在此基础上,通过体积排阻色谱(SEC)、凝胶电泳(SDS-PAGE)和粒径分析漆酶催化丝素蛋白溶液接枝COS的交联效果,对比膜材料的抗氧化性、抗菌性、热性能和生物相容性。研究结果表明,漆酶可以催化PHAD形成自聚体,并与COS发生席夫碱和迈克尔加成反应;SDS-PAGE和SEC结果验证了丝素蛋白溶液经漆酶催化后,SF蛋白分子量增大,丝素蛋白分子间发生自交联和接枝COS反应,制备得到的SF-g-COS膜材料具有较好的抗氧化性和抗菌性。在SF-g-COS膜材料制备基础上,借助己糖激酶和三磷酸腺苷(ATP)催化COS磷酸化。采用高效液相色谱(HPLC)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)和磷含量测试,探究酶促COS磷酸化的反应机制和作用效果。结果发现,己糖激酶可以催化COS中C6位的羟基磷酸化,并伴随着二磷酸腺苷(ADP)的生成;经己糖激酶磷酸化的COS的FT-IR结果中出现P=O和C-O-P的伸缩振动;SF-g-COS膜材料经过磷酸化处理后,磷含量明显增加。将磷酸化SF-g-COS膜材料在Ca/P溶液中进行交替法仿生矿化,借助X射线衍射(XRD)、扫描电子显微镜(SEM)和表面能谱图像(EDS-Mapping),分析了表面矿物相HAp的沉积效果,结果表明磷酸化处理改善了丝素膜材料的矿化效果,磷酸化的SF-g-COS膜表面形成更多HAp结晶相。此外,MG-63成骨细胞在上述丝素基仿生矿化材料表面具有较好的增殖和黏附效果,材料具有良好的生物相容性,在组织工程材料领域有潜在应用前景。