白细胞介素-15（IL-15）是Grabstein等人于1994年发现的一种具有免疫调节活性的细胞因子，它具有与白细胞介素-2（IL-2）相似的生物学功能，可促进T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（NK）的增殖与分化，增强细胞毒T细胞（CTL）／NK细胞的细胞毒活性等，并能发挥优于IL-2的抗肿瘤作用。 本论文是在我们的前期工作基础上，通过基因工程技术和蛋白质纯化技术获得了纯度在95％以上的重组人白细胞介素-15（rhIL-15），并用建立的小鼠肿瘤模型，研究了rhIL-15的抗肿瘤作用，为将rhIL-15开发成一类抗肿瘤新药奠定了基础。本论文工作主要研究内容包括三部分：（1）rhIL-15的原核表达、纯化和鉴定；（2）抗rhIL-15单克隆抗体的制备；（3）rhIL-15的急性毒性实验和抗肿瘤作用研究。 （1）rhIL-15的原核表达、纯化和鉴定 根据已知人白细胞介素-15（hIL-15）成熟蛋白的氨基酸序列，在不改变氨基酸序列的前提下，采用大肠杆菌偏爱密码子合成寡核苷酸片段，通过拼接PCR法成功合成hIL-15基因，分别插入原核表达载体pGEX-2T、pET_30a、pET₄₂、pETBlue-1或pBV₂₂₀，在多种宿主菌中获得了表达，最后筛选到稳定高效表达rhIL-15的工程菌株，即BL₂₁Star^TM（DE3）plysS／pBV₂₂₀-IL-15。在工程菌BL₂₁ Star^TM（DE3）plysS／pBV₂₂₀-IL-15中，rhIL-15以包涵体形式表达，最高表达量为菌体总蛋白的15.2％。经蛋白印迹法鉴定表明，此rhIL-15能与抗hIL-15的单克隆抗体特异结合。诱导表达后，分离出包涵体，经反复洗涤后，溶于6mol／L盐酸胍，获得rhIL-15粗品。再经反相层析分离后溶于8mol／L尿素，经透析或稀释复性获得有生物活性的rhIL-15，复性后的rhIL-15依次经DEAE弱阴离子交换层析和Sephadex G-25脱盐得到纯化的rhIL-15。纯化的rhIL-15行SDS-PAGE鉴定及光密度扫描分析，结果显示，纯度在95％以上。N端氨基酸序列分析结果表明，此rhIL-15 N端的前15个氨基酸序列与预期的一致；毛细管电泳分析表明，纯化rhIL-15的纯度接近100％，等电点为4.14，接近rhIL-15的等电点理论值4.42。纯化rhIL-15的体外促CTLL-2细胞增殖活性为6.7×10⁶U／mg。因此，可以确定分离纯化的表达蛋白即是rhIL-15。