甜茶中主要活性成分提取、纯化工艺的研究

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本文以甜茶为研究对象,研究了甜茶样品溶液的脱色条件,研究了甜茶中甜茶苷、甜茶总多酚和甜茶总黄酮三种主要成分的提取纯化工艺,研究了甜茶苷和甜茶总多酚的进一步纯化及对甜茶苷做了初步的成分鉴定,测定了甜茶苷粗品、甜茶苷精品和甜茶总多酚三种主要产品中所含金属含量。主要结论如下:(1)以对甜茶样品溶液的脱色率和甜茶苷的保留率作为考察指标,对9种树脂进行了筛选,并通过静态吸附试验和动态的单因素实验对筛选出的树脂的最佳脱色条件和再生条件进行了研究。结果表明:D296阴离子交换树脂的脱色效果最好,其最佳脱色条件为:上柱液pH值6.5,流速2.0 BV/h,上样浓度(以多酚浓度计)3.0 mg/mL。最佳再生条件为:用3%的NaOH和HCl溶液先后冲洗树脂至流出液近无色。(2)探索了一条以甜茶为原料,同时制备甜茶中三种主要产品的工艺:先用甜茶样品溶液过SA-3柱,再依次用20%和70%的乙醇溶液对SA-3柱进行洗脱。合并SA-3柱柱流液和20%乙醇洗脱液,上HPD826柱纯化,用40%乙醇洗脱液洗脱HPD826柱,得到甜茶总多酚产品。收集SA-3柱70%乙醇洗脱液,旋干,得到甜茶苷粗品的溶液。此溶液上聚酰胺柱纯化,收集柱流液可得到甜茶苷精品,再用75%乙醇洗脱聚酰胺柱得到甜茶总黄酮产品。其中,SA-3树脂的柱条件为:使用甜茶样品溶液以3.0 BV/h上样16 BV,收集柱流液得到Y2,用20%乙醇洗脱SA-3树脂7 BV,收集洗脱液得到B2,Y2和B2合并得到B3。再用70%乙醇洗脱SA-3树脂6 BV,收集洗脱液得到A5,A5’的纯度为45.7%、产率为7.1%。HPD826树脂的柱条件为:用B3样品溶液对HPD826树脂上样2BV,流速为3 BV/h,使用40%乙醇洗脱HPD826树脂3 BV,收集洗脱液得到B4,B4’的纯度为60.7%、产率为10.2%。聚酰胺100目树脂的柱条件为:使用A5样品溶液对聚酰胺树脂上样2 BV,流速为2 BV/h,收集柱流液得到A6,A6’的纯度为71.2%、产率为3.4%。再用75%乙醇洗脱聚酰胺树脂5 BV,流速为2 BV/h,收集洗脱液得到C1,C1’的纯度为55.9%、产率为0.81%。(3)使用溶剂萃取法、重结晶法对甜茶苷精品A6’进一步纯化,经纯化后得到A7’,A7’的纯度可以达到92%,并使用HPLC、IR、LC-MS等证明了A7’中的主要成分是甜茶苷。使用溶剂萃取法,Sephadex LH-20凝胶色谱法对B4’进一步纯化,纯化后得到了B11’,B11’的纯度可以达到73%。(4)使用原子吸收光谱法和原子荧光光谱法测定了A5’、A6’、B4’中的K、Na、Cu、Fe、Zn、Mn、Ca、Mg、Pb、Cd、Hg、As等元素。结果表明,这些元素在A5’、A6’、B4’中的含量符合国家相关标准。
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