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目的： 1、应用实时荧光定量聚合酶链反应（quantificational real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测91例非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)患者恶性胸腔积液和79例NSCLC患者肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变情况(其中21例NSCLC患者恶性胸腔积液及肿瘤组织配对)。 2、分析恶性胸腔积液中EML4-ALK融合基因突变情况与患者的性别、年龄、吸烟史、病理类型之间的关系。 3、对比恶性胸腔积液与肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变情况的一致性,探讨NSCLC恶性胸腔积液替代肿瘤组织检测 EML4-ALK融合基因突变的可行性,为NSCLC患者提供一种标本容易获取、操作简单、可以动态监测 EML4-ALK融合基因情况、对患者创伤较小、适于临床推广的EML4-ALK融合基因检测方法。 方法： 1、收集整理2013年6月-2014年2月经细胞学或病理学确诊为NSCLC患者恶性胸腔积液标本91例(每例患者抽取胸腔积液250-500ml,胸腔积液中找到癌细胞)和NSCLC患者的新鲜组织标本及蜡块组织标本79例,其中21例NSCLC恶性胸腔积液及肿瘤组织配对,利用qRT-PCR法检测EML4-ALK融合基因突变情况。2分析NSCLC患者恶性胸腔积液中EML4-ALK融合基因突变情况和患者临床特征的关系。 3、对比21例恶性胸腔积液和肿瘤组织配对样本的检测结果,分析其 EML4-ALK融合基因突变的一致性。 结果： 1、NSCLC患者恶性胸腔积液和肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变情况 91例NSCLC恶性胸腔积液标本中检测出8例EML4-ALK融合基因发生突变,阳性率为8.79％。79例NSCLC肿瘤组织标本中检测出9例EML4-ALK融合基因发生突变,阳性率为11.39%。 2、NSCLC患者恶性胸腔积液EML4-ALK融合基因突变情况与患者临床特征的关系 NSCLC患者恶性胸腔积液中的EML4-ALK融合基因阳性率在>60岁组为3.45%(2/58),≤60岁组为18.18%(6/33);男性组为8.93%(5/56),女性组为8.57%(3/35);吸烟组为2.04%(1/49),不吸烟组为16.67%(7/42);腺癌组为10.13%(8/71),非腺癌组为0(0/12)。统计学分析显示恶性胸腔积液中的EML4-ALK融合基因在年轻、不吸烟或轻度吸烟的NSCLC患者中阳性率高(P<0.05),而与患者的病理类型、性别无关系(P>0.05)。 3、NSCLC患者恶性胸腔积液和肿瘤组织EML4-ALK融合基因突变的一致性 91例NSCLC恶性胸腔积液标本和79例NSCLC组织标本中EML4-ALK融合基因阳性率分别为8.79%和11.39%,胸腔积液中EML4-ALK融合基因阳性率略低于肿瘤组织;恶性胸腔积液和肿瘤组织配对的21例标本中,二者同时发生突变者为2例,以组织标本中 EML4-ALK融合基因阳性为标准,两者一致性为66.67%(2/3)。 结论： 1、NSCLC患者恶性胸腔积液中的EML4-ALK融合基因阳性率为8.79%,略低于肿瘤组织标本的11.39%。 2、NSCLC患者恶性胸腔积液中的EML4-ALK融合基因的突变情况与患者的年龄、吸烟史有关,与患者病理类型可能相关(腺癌高于非腺癌),但与患者的性别无关。 3、qRT-PCR法能较为准确检测出NSCLC患者恶性胸腔积液中的EML4-ALK融合基因突变情况,其阳性率与肿瘤组织中EML4-ALK融合基因突变情况基本一致,为恶性胸腔积液代替肿瘤组织检测 EML4-ALK融合基因提供了依据,同时qRT-PCR法特异性强、操作简便、敏感度高,适于临床广泛推广运用。使用NSCLC恶性胸腔积液进行EML4-ALK融合基因检测具有动态性强、创伤小等优点,可作为临床ALK抑制剂分子靶向药物治疗的个体化预测的有效指标之一。