背景：肿瘤发生和发展的免疫学原因有：①肿瘤细胞通过改变自身表面的特异性分子，使机体的免疫监视功能低下，从而逃避机体免疫系统的监视；②肿瘤细胞通过不表达MHC1类抗原和其他抗原肽，从而下调T细胞的激活表位；③肿瘤细胞自身通过分泌免疫抑制因子，达到减弱机体对其免疫排斥反应。所以，提升机体的免疫功能不仅是防止肿瘤发生的重要方法，而且可以延长肿瘤患者的生存期。自1995年Sckaguchi等首先发现CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory Tcell, Treg)以来，Treg的研究得到了迅速发展。研究者发现肿瘤患者体内积聚着一群由肿瘤细胞诱导产生的具有负向调控机体免疫反应的CD4+CD25+Treg，具有免疫抑制效应，在维持机体机体免疫平衡和抑制自身免疫反应中具有重要作用。CD4+CD25+Treg分为天然Treg和适应性Treg。天然Treg细胞主要是指一类由胸腺T细胞发育而来，它们在胸腺的髓质内发育生长直至成熟后，随即转移到外周血中，具备抑制自身免疫应答功效的细胞亚群；适应性Treg是指在特定的免疫因子作用下，由抗原刺激成熟T细胞活化，诱导产生的细胞亚群。CD4+CD25+Treg细胞在功能上体现为免疫无能和免疫抑制两种特性。免疫无能性体现在对于高浓度白细胞介素2（IL-2）单独刺激或/和被经T细胞受体(TCR)刺激都没有任何反应,而且也不分泌IL-2；免疫抑制性体现在通过一些介导信号（如T细胞受体等）的刺激使其活化，从而抑制相关T细胞（如CD4+和CD8+等）的活化和增殖，并且抑制非特异性抗原。CD4+CD25+Treg表达多种细胞表面分子,如CD25high〔白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)受体的链〕、CTLA-4(细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4)、GITR(肿瘤坏死因子受体超家族成员糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体)等。同时，CD4+CD25+Treg高表达叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)，所以说Foxp3可作为其特征性标记。Foxp3是基因家族叉头翼状螺旋转录因子中的一员,它包含一个保守的氨基酸序列的螺旋转录因子、一个C2H2型的锌指蛋白基因和一个亮氨酸拉链基因序列。人类Foxp3基因位于Xp11.23,包括11个编码外显子、3个非编码外显子和10个内含子，它的表达场所主要位于细胞核内，此种表达方式和它依靠核转录因子的功能一致。Foxp3基因是首要的正向调节功能蛋白，它是促进CD4+CD25+Treg的细胞发育和使其发挥最佳功效的前提条件。大量研究显示，在肺癌﹑食管癌﹑乳腺癌、胃肠道肿瘤﹑肝癌和卵巢癌等患者的外周血中或肿瘤局部，均发现CD4+CD25+Treg细胞的表达都明显增高，提示CD4+CD25+Treg细胞在肿瘤的免疫反应中，发挥了重要的作用。铜绿假单胞菌注射液（PA-MSHA）是一种通过基因工程的技术，以铜绿假单胞菌为载体，制备的表达甘露糖敏感性菌毛的灭活制剂。研究表明，PA-MSHA可以使肿瘤细胞膜的结构和功能发生转变，从而改变肿瘤细胞的生物学行径，下降肿瘤细胞的增殖﹑侵犯和转移能力，从而启动凋亡流程，使肿瘤细胞凋亡。多项研究显示，PA-MSHA具有很强的免疫刺激活性：它可以促进树突状细胞(DC)等抗原提呈细胞的成熟,对刺激分子的表达和对肿瘤抗原的加工提呈能力有一定的提高和协同作用；它还可以促进Thl细胞因子的产生,促进T淋巴细胞的活化,并刺激细胞毒T淋巴细胞（CTL）的产生,使机体的特异性细胞免疫功能得到增强；而且它能间接促进NK细胞的活化，以及直接诱导NK的活化,达到增强机体的非特异性抗肿瘤免疫的作用。临床研究显示PA-MSHA能激活人体的免疫反应，提高机体免疫应答水平，重建免疫监视功能，起到免疫监视、抑制和杀伤癌细胞的作用。当前，PA-MSHA在各种恶性肿瘤的辅助治疗中已得到广泛的应用。我们将通过对非小细胞肺癌患者围手术期进行PA-MSHA干预治疗，动态观察围手术期外周静脉血中各项免疫学指标的水平，评价PA-MSHA对非小细胞肺癌患者围手术期免疫功能的影响及安全性研究。方法:在2013年4月-2013年10月期间，将来自河北医科大学第四医院胸五科收治的60例非小细胞肺癌患者（手术前均通过纤维支气管镜活检获得病理证实，手术前都没有进行过放疗或化疗），按随机排列表法分为铜绿假单胞菌注射液治疗组(实验组，30例)和对照组（30例），对两组患者均实施规范化的肺癌根治术。实验组患者于手术结束前胸腔喷洒PA-MSHA5mL，术后第1d、3d、5d、7d和9d皮下注射PA-MSHA1次，1ml/次；对照组患者于手术结束前胸腔喷洒生理盐水5mL，术后第1d、3d、5d、7d和9d皮下注射生理盐水1次，1ml/次。选取先入院的10例患者，按随机排列表法分成实验组（5例）和对照组（5例），进行预实验：两组患者均实施规范性的肺癌根治术。实验组患者于术中胸腔喷洒5ml铜绿假单胞菌注射液后，分别于术后第1d、3d、5d、7d、9d、11d清晨皮下注射铜绿假单胞菌注射液1次，1ml/次。对照组患者于术中胸腔喷洒5ml生理盐水后，分别于术后第1d、3d、5d、7d、9d、11d清晨皮下注射生理盐水1次，1ml/次。两组患者分别于手术前1d至术后第12d每日清晨，在空腹状态下用EDTA抗凝管采集外周静脉血2ml，标本在3个小时之内上流式细胞仪测定CD3+、CD4+、NK、CD4+CD25+Treg细胞和Foxp3细胞计数水平，分析总结各项免疫学指标结果并找出其有明显变化趋势的具体时间，分别为手术前1d、术后第2d、术后第6d和术后第10d，这些时间点即为其他患者的最佳检测时间。两组剩余患者均于手术前1d，术后第2d、6d和10d清晨，在空腹状态下用EDTA抗凝管，分别采集外周静脉血2ml，标本在3小时内用流式细胞仪检测患者的各项免疫学指标，包括CD3+、CD4+、NK、CD4+CD25+调节性T细胞和Foxp3水平。最后应用SPSS19.0统计软件对所有数据进行统计分析。结果：两组患者术后CD3+、CD4+和NK细胞均呈先下降后升高的趋势，说明手术打击可能导致患者免疫功能下降，使术后CD3+、CD4+和NK细胞出现暂时性的下降，随着患者机体各系统功能逐渐恢复，CD3+、CD4+和NK细胞逐渐升高，但实验组术后第10d的CD3+、CD4+和NK细胞明显高于对照组（P＜0.05），说明PA-MSHA对于机体的细胞功能有正向调控作用。肿瘤切除后，两组患者CD4+CD25+Treg和Foxp3数目均下降，实验组术后第2d﹑6d﹑10d的CD4+CD25+Treg和Foxp3数目均较术前显著降低（P＜0.05），对照组仅术后第10d的CD4+CD25+Treg和Foxp3数目较术前显著降低（P＜0.05），提示肿瘤患者术前CD4+CD25+Treg和Foxp3计数较高，瘤体切除后，CD4+CD25+Treg和Foxp3数目逐渐降低，表明CD4+CD25+Treg和Foxp3在非小细胞肺癌中具有重要作用，手术治疗可以明显减少Treg的数量并减弱其免疫抑制功能，机体的免疫功能得到有效地改善；实验组术后第10d的CD4+CD25+Treg和Foxp3数目显著低于对照组（P＜0.05），说明PA-MSHA对于NSCLC患者术后的CD4+CD25+Treg和Foxp3具有负向调控作用，促进了机体免疫功能的重建，更加有利于增强患者术后的免疫功能。结论：NSCLC患者术前免疫状态低下，手术打击使患者的免疫功能出现暂实性的下降，在机体各个系统的功能逐渐恢复后，机体的免疫状态也不断地增强。铜绿假单胞菌注射液干预治疗的NSCLC患者术后CD4+CD25+Treg和Foxp3数目明显低于术前水平；CD4+CD25+Treg和Foxp3细胞水平与机体的免疫功能呈负相关。铜绿假单胞菌注射液能明显改善NSCLC患者术后的免疫状态。