第一部分 目的：探讨建立P2X4受体基因异体表达的可行性，为研究P2X4受体的功能及调控机制奠定基础。方法：利用体外转录cRNA技术，将克隆至真核表达载体pcDNA3的P2x4的cDNA．转录成P2x4的cRNA，然后通过显微注射技术将该cRNA注入去滤泡膜的成熟非洲爪蟾卵母细胞的胞质中进行表达，并用双微电极电压钳技术检测所表达受体的功能。结果：P2X4受体能成功地在大多数爪蟾卵母细胞上表达，外加ATP可使这些细胞产生ATP诱导电流，该电流具有浓度依赖性和饱和现象。结论：爪蟾卵母细胞可成功表达外源性的离子型P2X4受体。 第二部分 目的：研究P2X4受体介导的ATP-激活电流(ATP-activated current，IATP)的特征。 方法：应用双电极电压钳技术记录表达在非洲爪蟾卵母细胞上的P2X4受体介导的IATP。 结果：(1) 大鼠P2X4受体可高效表达于非洲爪蟾卵母细胞。(2) 外加1μmol/L，10/μmol/L和100μmol/L ATP时，IATP激活相的时间常数ton分别是2.58±0.60 s，1.80±0.47 s and1.05±0.24 s。IATP失敏相的时间常数tdes分别是9.54±1.56 s,6.52±1.24 s and 4.11±0.78 s。(3) ATP作用的量．效关系：EC50为15.9±1.7μmol/L，Hill系数为0.95±0.07。(4) 浓度为100μmol/L的PPADS和Suramin不改变IATP的幅值。(5) IATP呈电压依赖性和内向整流特性。(6) 加药时间分别为20 S,30 S,45 s和60 s的情况下，IATP幅值并无显著性差异。 结论：以上结果增进了我们对P2X4受体介导的ATP-激活电流特征的认识，为进一步研究P2X4受体的功能和调控机制奠定基础。 第三部分 目的：研究铝对大鼠P2X4受体功能的调制作用及其机制。方法：应用双电极电压钳记录表达在非洲爪蟾卵母细胞上的P2X4受体介导电流(IATP)。结果：(1) 在有100μmol/L氯化铝存在的情况下，ATP-激活电流(IATP)的失活时间常数(tdes)变小，而激活时间常数(ton)增大；(2) 在表达有P2X4的非洲爪蟾卵母细胞，铝在浓度为3～1000μmol/L的范围内对IATP的抑制作用呈浓度依赖性，浓度越高，抑制作用越明显，其作用的IC50为16.2μmol/L；(3) 铝使ATP最大效应降低（），从而使IATP的量效曲线下移，但并不改变ATP作用的EC50值；(4) 铝的这种抑制作用并不依赖于钳制电压，也并不改变IATP的翻转电位；(5) 在有10μmol/L铝存在的情况下，IATP并没有在每间隔3分钟给药一次的情况下出现逐渐减小的情况。并且，铝的这种抑制作用存在时间依赖性，60S的预加时间可使铝达到其最大抑制效应。结论：铝能抑制表达在非洲爪蟾卵母细胞上的P2X4受体介导的ATP-激活电流。铝的这种抑制作用是一种非竞争性抑制，其机制可能是铝通过与P2X4受体膜外结合位点结合，通过变构调节来实现的。