背景：目前在临床上应用组织工程软骨修复关节软骨缺损已取得了一定成功。但组织工程软骨在临床应用中还存在一些问题亟待解决，特别是移植物与受体部位固定困难，由于关节运动时的剪切力易导致组织工程软骨脱落，以及组织工程软骨与宿主骨界面愈合不良是影响该手术疗效的突出问题。从马赛克手术人们得到启示，构建组织工程骨-软骨复合组织块可以解决临床上组织工程软骨固定困难的问题。目前一些学者已经在体外成功构建了骨-软骨复合组织块，人们应用组织工程骨-软骨复合组织块修复动物关节软骨缺损也取得了较好效果。这些研究还存在一些问题，其中有些实验缺损面积过小，难以模拟临床常见的软骨缺损。我们认为较小的缺损由于周围软骨细胞的迁移有自我修复的倾向。这些试验中所制造的关节软骨缺损都为新鲜创伤，而且往往位于关节非负重区，这与临床常见的关节缺损不相符合。此外，骨-软骨复合组织块修复软骨缺损的效果是否优于单纯组织工程软骨未见报告。目的：比较应用组织工程骨-软骨复合组织块与单纯组织工程软骨修复猪膝关节软骨缺损的疗效。方法：实验共分为三部分：第一部分：从猪膝关节股骨髁非负重区分离关节软骨细胞，体外培养后II型胶原免疫细胞化学鉴定。从猪股骨髁松质骨分离成骨细胞，体外培养后碱性磷酸酶染色鉴定。第二部分：分别将体外分离、培养的关节软骨细胞和成骨细胞植入PLGA（直径8mm，厚2mm）和TCP（直径8mm，厚6mm）支架构建组织工程软骨和组织工程骨，缝合后形成组织工程骨-软骨复合组织块，空白复合支架作为对照组，植入裸鼠皮下8周后取出，组织学比较观察构建的复合组织块，同时检测复合组织块的GAG含量。第三部分：在12只猪（雄性6只、雌性6只）双侧股骨内髁负重区制造直径8mm软骨缺损，共24个缺损。4周后，实验分三组，组织工程骨-软骨复合组织块修复组，组织工程软骨修复组，空白组作为对照，每组8个缺损。6月后对修复部位行大体观察和组织学观察，免疫组化检测II型胶原的表达，同时测定新生软骨的力南京医科大学博士学位论文学性能和GAG含量。结果：第一部分：我们成功的从猪股骨髁分离软骨细胞，体外培养后免疫细胞化学显示细胞表达大量II型胶原，成骨细胞分离后染色见细胞分泌碱性磷酸酶。第二部分：构建的复合组织块在裸鼠皮下成功的形成了骨-软骨组织，整合良好。第三部分：在复合组织块组中缺损区有大量新生软骨，大体观察评分明显优于单纯组织工程软骨组(P<0.05)。组织学显示复合组织块组缺损区被新生透明软骨修复，新生软骨中的圆形细胞分布均匀，组织学评分复合组织块组优于组织工程软骨组和空白支架组(P<0.05)。复合组织块组中的新生软骨弹性模量和GAG含量也优于组织工程软骨组(P<0.05)。结论：组织工程骨-软骨复合组织块修复软骨缺损的效果明显优于组织工程软骨。