莱克多巴胺适配体识别速测技术研究

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莱克多巴胺是一种具有苯乙醇胺类基本结构的化学合成药物,它通过抑制脂肪的合成提高瘦肉与脂肪的比率,增加饲料的转换效率,提高肌肉质量。但是如果动物体内摄入大量的莱克多巴胺,很难通过代谢排出体外,会使畜产品中莱克多巴胺的残留超标。莱克多巴胺通过食物链被人们食用后会出现肌肉振颇、头疼、心慌、恶心、战栗、呕吐等不良症状,极大地危害人们的身体健康。因此,建立快速、准确检测畜产品中莱克多巴胺的方法意义重大。本论文建立了三种快速检测莱克多巴胺的方法,主要包括以下三个方面的工作:1.基于适配体—胶体金可视化检测莱克多巴胺适配体的最佳浓度为5μmol/mL的条件下,考察了电解质NaCl浓度、培育时间、培育温度、溶液pH值对实验的影响。在优化的实验条件下,莱克多巴胺的检出限可达10 ng/m L,线性范围为10~400 ng/m L,相关系数R2为0.997。对混合饲料进行检测,结果显示,检出限为10 ng/m L,线性范围为10~400 ng/mL,R2达到0.973,平均回收率为79.4~121.1%,重复检测5次的相对标准偏差(RSD)为0.415~4.475%,而且莱克多巴胺与沙丁胺醇和克伦特罗均无交叉反应。2.基于适配体复合膜电化学传感器测定莱克多巴胺的研究基于多壁碳纳米管(MWCNTs)、L-精氨酸(P-L-Arg)、胶体金(Au NPs)和氨基修饰的适配体成功地构建了RAC适配体电化学免疫传感器。考察了扫描速度、培育温度、培育时间、适配体修饰量以及pH值等条件对传感器响应性能的影响。结果表明:该传感器检出限低、选择性好。在优化的条件下,其线性范围为1.00×10-11~1.00×10-6 mol/L,R2达到0.980,检出限为1.00×10-11 mol/L。该传感器操作简单、性能稳定,将其用于实际猪尿中莱克多巴胺的检测,回收率为97.1~103.0%,相对标准偏差低于9.4%。3.基于巯基修饰的适配体电化学传感器检测莱克多巴胺应用功能化石墨烯(PDDA-GNs)、胶体金(AuNPs)修饰电极获得AuNPs/PDDAGNs/GCE电化学免疫传感器。通过自组装作用将带巯基的莱克多巴胺(RAC)适配体固定于电极表面,制得新型莱克多巴胺适配体电化学传感器。考察了扫描速度、培育温度、培育时间、适配体修饰量以及pH值等条件对传感器响应性能的影响。结果显示:该传感器的线性范围为1.00×10-12~1.00×10-7 mol/L,线性相关系数R2达到0.996,检出限低至1.00×10-12 mol/L。该传感器具有选择性好、操作简单和性能稳定等优点,将其用于实际猪尿中莱克多巴胺的检测,回收率为达到96.4~104.0%,RSD值低于9.1%。
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