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研究背景:神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)是儿童颅外最常见的实体瘤[1],其发病率在儿童恶性肿瘤中居第4位[2]。起源于胚胎期神经嵴细胞,由未分化的交感神经细胞组成,因其具有恶性程度高、发生转移早、死亡率高且预后差而被称为儿童癌症之王[3]。临床上主要依靠外科手术、放射治疗、化学药物等综合治疗方法。为提高治疗效果和预防复发及保证患儿生活质量,在治疗神经母细胞瘤中,化学药物因可作用于肿瘤的始终而成为不可或缺的手段,但临床实践证明,化学药物普遍存在不同程度的毒副作用及耐药特性[4,5]。因此,国内外学者逐渐将研究方向转向对NB的生物学、遗传学特性及发病机制的研究,对寻找新的肿瘤治疗方法、提高患儿的治愈率和改善患儿的远期预后具有重要的临床价值。所以本实验选用神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株来研究姜黄挥发油(turmeric volatile oil,TVO)的抗肿瘤作用,并研究其联合顺铂(Cisplatin,DDP)的抗NB作用。本文分两部分进行阐述:第一部分阐述姜黄挥发油对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖及侵袭力的影响;第二部分探讨姜黄挥发油联合小剂量顺铂对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制作用。第一部分姜黄挥发油对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖及侵袭力的影响目的探讨姜黄挥发油(TVO)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法分别用不同浓度的TVO(1.25~160 mg/L)行体外干预SH-SY5Y细胞,应用MTT法检测细胞存活率;细胞划痕实验检测160 mg/LTVO对SH-SY5Y细胞迁移能力的影响;应用Transwell细胞侵袭试验检测细胞侵袭能力;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果随着TVO浓度的升高及干预时间的延长,SH-SY5Y细胞存活率逐渐减低(P<0.01),凋亡率逐渐增加;经160mg/L TVO的培养液培养0、12、24h后,SH-SY5Y细胞迁移度明显低于对照组(P<0.01);随TVO浓度增高,SH-SY5Y细胞侵袭能力逐渐减弱(P<0.01),且药物浓度达到160 mg/L时,侵袭力与顺铂无明显差异。结论TVO能有效的抑制SH-SY5Y细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。第二部分TVO联合小剂量DDP对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞抑制作用的研究目的研究TVO联合小剂量DDP对体外神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖、凋亡的影响,并初步探讨TVO联合DDP作用于SH-SY5Y细胞的化疗增敏作用的分子机制。方法分别用TVO、DDP、TVO联合DDP处理SH-SY5Y细胞,应用MTT法检测处理后细胞生长抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC50);根据MTT检测结果设空白对照组、TVO组、DDP组和TVO联合DDP组,在倒置显微镜下观察各组细胞生长状态;用Caspase-3检测试剂盒检测SH-SY5Y细胞Caspase-3酶的表达情况;用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞总凋亡率。结果单独TVO及DDP组随着各自浓度的升高SH-SY5Y细胞增殖抑制率逐渐升高(P<0.01),其各自IC50分别为23.231mg/L及2.617mg/ml;不同浓度TVO联合小剂量DDP(0.625、1.25、2.5、5mg/ml)作用于SH-SY5Y细胞48h后的增殖抑制率出现逐渐升高的趋势,且与单独DDP组及对照组比较差异具有显著性(P<0.01);不同浓度TVO联合0.625mg/ml DDP及2.5mg/LTVO联合2.5mg/ml DDP表现出药物的相加作用,其余联合组均表现出药物的协同作用。倒置显微镜下见DDP组和TVO联合DDP组SH-SY5Y细胞脱落死亡明显,尤以联合组更明显,比空白对照组及TVO组细胞生长缓慢,且数量稀少。TVO联合DDP(0.625、1.25、2.5mg/ml)组和单独TVO组的Caspase-3酶活性随着药物浓度增加酶活性随之增强(P<0.01);单独DDP组与对照组Caspase-3酶活性水平相比差异无统计学意义(P>0.01);联合组与单独DDP组Caspase-3酶活性水平相比差异具有统计学意义(P<0.01)。流式细胞仪检测示联合组、DDP组、TVO组与对照组相比差异性有统计学意(P<0.01);不同浓度TVO联合同一浓度DDP和单独该浓度的DDP组相比较差异具有统计学意义(P<0.01),且随着TVO浓度的升高细胞总凋亡率逐渐升高。结论TVO联合小剂量DDP可以增强DDP对SH-SY5Y细胞株的增殖抑制作用,且具有明显的协同效应,TVO对其增敏作用的机制可能是TVO协助DDP特异性激活Caspase-3酶,从而诱导SH-SY5Y细胞凋亡。