NOL10在肾癌中的表达及生物学功能研究

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目的:探究NOL10在肾癌中的表达特征及其对肾癌细胞生物学功能的影响。方法:1、利用TCGA数据库分析NOL10在539例肾透明细胞癌组织及72例癌旁组织中的mRNA水平的表达差异。2、利用GEPIA数据库对NOL10表达水平与肾癌患者总生存期进行生存分析。3、Western Blot检测正常肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株ACHN,796-P,786-O和OS-RC-2中NOL10的蛋白表达情况,分析表达差异。4、在肾癌组织芯片中,通过免疫组织化学技术检测70例肾透明细胞癌组织及70例配对的癌旁组织中NOL10的蛋白表达,以免疫反应积分法进行评分,分析表达差异。5、采用卡方检验或Fisher精确检验分析NOL10表达水平与肾癌患者临床病理参数之间的关系。6、通过小干扰RNA敲减ACHN及786-O细胞株中NOL10的表达,Western Blot检测NOL10的蛋白表达来验证干扰效率,设NOL10低表达的ACHN及786-O肾癌细胞株为siRNA-NOL10实验组,同时转染阴性对照小干扰RNA用作阴性对照组。7、CCK8法及EdU法检测siRNA-NOL10实验组和阴性对照组的增殖水平。8、Transwell实验检测siRNA-NOL10实验组和阴性对照组的迁移和侵袭能力。9、流式细胞术检测siRNA-NOL 10实验组和阴性对照组细胞的细胞凋亡水平。10、Western Blot检测siRNA-NOL10实验组及阴性对照组细胞的肿瘤侵袭及凋亡相关蛋白的表达。结果:1、NOL10在mRNA水平的表达量在肾癌组织中低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。2、NOL10高表达的肾癌患者较NOL10低表达的肾癌患者具有更高的总生存期,差异具有统计学意义(P<0.05)。3、NOL10在786-O,ACHN,769-P和OS-RC-2肾癌细胞株中的蛋白的相对表达量均明显低于HK-2正常肾小管上皮细胞株,差异具有统计学意义(P<0.05)。4、NOL10在肾癌组织中的表达低于其在癌旁组织中的表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。5、NOL10的表达水平与肾癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、Fuhrman病理分级、T分期、M分期、TNM临床分期等病理参数未见显著相关性(P>0.05)。6、通过小干扰RNA成功敲减了 ACHN及786-O细胞株中NOL10的表达。7、在ACHN及786-O细胞株中,阴性对照组细胞于450nm处的吸光度,在24h,48h,72h均低于siRNA-NOL10实验组,差异具有统计学意义(P<0.05)。EdU法显示,在ACHN及786-O细胞中,siRNA-NOL10实验组EdU阳性细胞的百分比均高于阴性对照组中的EdU阳性细胞的百分比,差异具有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NOL10实验组细胞的增殖能力高于阴性对照组。8、在ACHN及786-O细胞株中,阴性对照组迁移及侵袭细胞数目均明显低于siRNA-NOL10实验组数目,差异均具有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NOL10实验组的细胞迁移及侵袭能力均强于阴性对照组细胞。9、在ACHN及786-O细胞株中,阴性对照组的早期及晚期凋亡细胞的百分比分别高于siRNA-NOL10实验组早期及晚期凋亡细胞的百分比,差异均具有统计学意义(P<0.05)。siRNA-NOL10实验组的细胞凋亡水平低于阴性对照组。10、在ACHN和786-O细胞株中,阴性对照组凋亡相关蛋白Bax的表达高于siRNA-NOL10实验组;而抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达低于siRNA-NOL10实验组。与迁移侵袭相关的E-cad蛋白表达在阴性对照组明显高于siRNA-NOL10实验组;而N-cad蛋白的表达在阴性对照组低于siRNA-NOL10组。结论:NOL10在肾癌中低表达,并与肾癌患者的预后相关。抑制NOL10的表达可以通过抑制E-cad,Bax的表达,及促进N-cad,Bcl-2的表达,从而抑制癌细胞的凋亡,促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭。
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