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关于昆虫抗微生物肽(Insectantimicrobialpeptide)同系物(Isoforms)基因之间的抗性功能差异和免疫诱导表达差异的问题，杨婉莹(2005)首次对黑腹果蝇抗真菌肽Drosmycin的7个同系物基因进行了研究。本文选择在家蚕基因组中新注释发现的Gloverins和Enbocins抗微生物肽同系物基因进行这一问题的研究，希望不但能够对昆虫抗微生物肽同系物基因的抗性功能差异和免疫诱导表达差异的研究提供新的实验证据，而且能够对家蚕的转基因抗病育种、鳞翅目农林害虫的转基因生物防治和进行有自主知识产权的生物制(药)剂研究提供理论参考。
为此，本文研究将家蚕6条Gloverins同系物基因(gloverins)和2条Enbocins同系物基因(enbocins)在pET-2ld载体／大肠杆菌Rosetta(DE3)表达系统成功地进行了克隆表达，鉴定了Gloverins同系物蛋白对部分受试细菌的抗性差异鉴定和对其基因进行免疫诱导的半定量RT-PCR的表达差异检测。主要结果如下：
(1)氨基酸序列分析表明：由gloverins推导的同系物为170个左右的氨基酸残基组成，富含编码Arg、Gly、Ile、Leu、Pro等氨基酸的稀有密码子，氨基酸位点的保守性强。为了研究的方便，将这6条gloverins分别命名为gloverin-a(gl-a)、gloverin-b（gl-b)、gloverin-c(gl-c)、gloverin-d(gl-d)、gloverin-e(gl-e)、gloverin-f(gl-f)。
(2)用细菌诱导家蚕蛹，提取总RNA，合成cDNA第一链，利用设计的特异引物或简并引物，采用RT-PCR的方法获得6条Gloverins和2条Enbocins同系物的基因序列，克隆至表达载体pET-2ld，构建成重组表达载体。
(3)利用可以提供稀有密码子的大肠杆菌表达菌株Rosetta(DE3)，将Gloverins进行了诱导表达。研究了诱导时间、诱导剂浓度、诱导温度、菌液的起始浓度等因素对Gloverins表达效率的影响，确定了适宜的诱导表达条件。可溶性分析结果表明它们主要以可溶形式表达，经Westernblotting和SDS-PAGE检测，高效表达的目的蛋白占电泳谱可检测总蛋白的40％以上。对表达培养液上清进行Ni-NTA亲和层析纯化和脱盐处理，分离得到Gloverins同系物蛋白。
(4)对克隆表达的6个Gloverins同系物蛋白进行的抗菌活性差异鉴定表明，其中5个对灵菌(SeiiatiomaicesceisBizio)、大肠杆菌(EscherichiacoliK12D31)、绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)3种革兰氏阴性细菌表现出不同程度的抗菌活性，抗菌活性大小依次为：对大肠杆菌K12D3l：Glov-C>Glov-A=B=D>E；对绿脓杆菌为：Glov-A>B>C>D>E：对灵菌：Glov-A>C>B=E>D。即它们对这三种革兰氏阴性菌抗性差异的总体趋势表现为：Glov-A的抗性最强(对大肠杆菌K12D31最低抑菌浓度是1．5gmol／L)，Glov-B、Glov-C和Glov-D相似，Glov-E较弱，Glov-F完全没有抗性：六条Gloverins同系物蛋白对供试的革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)均没有抗性。
(5)用巴斯德毕赤酵母(PichiaPastoris)、大肠杆菌K12D31和金黄色葡萄球菌作为诱导源，免疫注射化蛹第4天的家蚕蛹，利用家蚕同系物基因gloverins之间的序列差异设计特异引物，进行半定量RT-PCR转录表达差异的测试。结果表明：gloverins同系物都具有较弱的基础转录活性，并且随着诱导后时间的延长表达活性不断提高，这其中glov．b／c、d、e表达活性的提高尤为显著。
(6)glov-a、b／c、d、e等5个Gloverins同系物基因对上述3种菌源存在免疫诱导的表达差异：按照转录活性的强弱，大致次序为glov-b／c、d、e>glov-a。大肠杆菌和金黄色葡萄球菌在蛹期对Gloverins同系物基因的诱导敏感性明显高于酵母诱导源。
(7)glov-f对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的诱导不敏感，诱导后的转录活性与未诱导的基础转录活性没有明显的差别，但对酵母有滞后的诱导敏感性，至诱导后8h后转录表达活性明显加强。其原因有待进一步研究。