论文部分内容阅读
灵芝三萜酸是除多糖外灵芝中最主要的活性成分,具有广泛的药理作用。然而,目前市场上三萜酸产品稀少,价格昂贵,严重阻碍了对其药理和应用开发的进一步研究。因此,对不同来源的灵芝材料进行三萜酸的提取并对其组分进行分析具有重要的现实意义。本论文以灵芝子实体和菌丝体为研究对象,分别对其三萜酸的提取技术进行了试验,在此基础上,对三萜酸的组分进行了初步分析,并对相应产品的稳定性进行了研究,得出以下主要结果：1.以灵芝子实体为研究对象,通过对比实验确定以无水乙醇为提取溶剂,不经酶预处理的回流提取法作为研究灵芝子实体中三萜酸高效提取的基础。进一步进行单因素实验、Box-Benhnken设计以及响应面法优化。以液料比(A)、提取时间(B)和提取次数(C)为提取的关键因素,通过Box-Benhnken设计及响应面法优化,得到了可预测灵芝了实体三萜酸提取率的回归模型：Y=0.33+0.003125A+0.021B-0.014C+0.0005AB-0.019AC-0.005BC-0.044A2-0.040B2-0.032C2.经分析,得到提取灵芝子实体中三萜酸的最佳条件为：液料比25：1,提取时间2h,提取次数3次。最优条件下的子实体三萜酸提取率为(0.335±0.008)mg/g,与模型预测值相符。2.以灵芝CGMCC5.616菌株为研究对象,通过摇瓶发酵获得大量菌丝体。确定以无水乙醇进行回流提取的前提下,采用单因素实验考察液料比、提取时间和提取次数等对灵芝菌丝体三萜酸提取率的影响,然后通过中心组合旋转设计和响应面优化实验,得到了灵芝菌丝体三萜酸提取率对这三个因素的多元回归方程：Y=0.52+0.022A+0.027B+0.064C+0.021AB-0.013AC+0.010BC-0.056A2-0.094B2-0.057C2。确定了最佳提取条件为：液料比12：1,提取时间2h,提取次数3次。验证试验结果表明菌丝体三萜酸提取率为(0.537±0.005))mg/g,与模型预测值相符。3.以ADS-8大孔树脂为媒介,对提取的灵芝三萜酸进行了初分离。考察了洗脱流速对灵芝菌丝体三萜酸的影响,液相色谱分析显示,不同流速下洗脱出的三萜酸组成不同,特别是保留时间为44.66mmin的色谱峰在含量上差异较大；当流速为3mL/min时,与1 mL/min,2mL/min条件下相比,洗出了两个新的组分峰(保留时间分别为66.27min和67.31min)。另外,乙醇浓度对菌丝体三萜酸的洗脱有显著影响,70%-90%的乙醇可将三萜酸完全洗脱下来,60%的乙醇可洗脱下大部分的三萜酸,而40%和20%的乙醇洗脱效果不理想。高效液相色谱进一步分析表明,菌丝体和子实体中三萜酸的组分存在着明显差异,子实体中三萜酸成分出峰较晚,且组分相对较多。4.采用LC-ESI-MS分析灵芝菌丝体中三萜酸成分,结果显示,菌丝体中含有少量的灵芝酸A和灵芝酸B。另外,菌丝体中两个主要的洗脱峰,一个为灵芝酸A的类似物,另一个为Ganolucidic acid B的类似物,但其具体结构还有待进一步确定。5.三萜酸对溶剂的稳定性试验结果表明,菌丝体与子实体三萜酸的稳定性相似,都受酸催化的影响,与溶剂的极性无关。对温度的稳定性试验结果表明,在温度为25℃及以下时,子实体和菌丝体三萜酸相对较稳定；随着温度的升高,两类三萜酸都有不同程度的降解。