【摘 要】
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采用丝状噬菌体表达载体pCANTAB 5E,构建了表达于丝状噬菌体M13外壳蛋白pⅢ N-末端的小鼠单链抗体库.首先从未免疫的昆明种小鼠的新鲜脾脏中提取mRNA并经逆转录 获得其总cDNA
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采用丝状噬菌体表达载体pCANTAB 5E,构建了表达于丝状噬菌体M13外壳蛋白pⅢ N-末端的小鼠单链抗体库.首先从未免疫的昆明种小鼠的新鲜脾脏中提取mRNA并经逆转录 获得其总cDNA.编码重链和轻链可变区V<,H>、V<,L>的基因片段分经PCR扩增出来,再经重组PCR将两片段由一编码(Gly<,4>Ser)<,3>十五肽的接头连在一起.重组产物经Sfi Ⅰ和NotⅠ酶切后克隆到经相应酶切的噬菌质粒载体pCANTAB 5E中,并电击转化大肠杆菌TG1.由转化率计算出抗体库容量约为1.7×10<,8>.经辅助噬菌体M13KO7超感染 而 回收展示有单链抗体的融合噬菌体颗粒.感染单位测定结果表明,培养上清约含10<11>cfu/ml的包装噬菌质粒.由此构建成噬菌体抗体库.随机挑取18个克隆,抽提其重 组噬菌质粒DNA,并以之为模板,以含SfiⅠ和NotⅠ酶切位点的寡核苷酸为引物进 行PCR扩增,结果表明18个克隆均含有外源单链抗体基因片段.另外,应用表面离子体激元共技术(SPR)研究了蓖麻毒素与它的两种单克隆抗体相互作用的动力学.表面等离子体激元共振技术是一种可微量、实时、动态地监测生物分子相互作用的生物传感技 术. 通过SPR技术测定了两种单抗与蓖麻毒素的亲和常数,并对两种缺体的抗原表进 行了初步分析.上述结果表明,噬菌体抗体库是选择特异结合蛋白或单链抗体的有力 工具,为 抗体工程提供了一条有效途径.小鼠单链抗体库的构建和亲和淘选方法的建立为进一步的研究和应用奠定了基础.
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