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第一部分中国女性血清脂联素、瘦素水平与骨密度及骨转换生化指标的关系目的：作为脂肪组织分泌的主要循环肽,脂联素和瘦素对骨代谢有着重要的影响,但它们与女性骨密度(BMD)的关系仍不太明确。本部分研究就女性血清脂联素、瘦素水平与BMD及骨转换生化指标的关系进行探讨。方法：用ELISA测定265例绝经前、336例绝经后中国长沙地区健康成年女性血清脂联素、瘦素、血清骨特异性碱性磷酸酶(BAP)和血清Ⅰ型胶原交联氨基末端肽(NTX)等生化指标；用双能X射线吸收测定法(DXA)测定全身、腰椎L2-L4、总髋骨、总前臂的BMD以及脂重和瘦重；指标间的相关性采用Pearson’s相关分析和偏相关分析,并用多元线性回归模型分析哪些指标可作为BMD的独立预测因子。结果：多元线性回归分析表明,在绝经后的中国女性,绝经年限、瘦重、雌二醇(E2)和脂联素均为BMD的独立预测因子(P<0.05或P<0.01),而脂重和瘦素则均不是BMD的独立预测因子；但在绝经前的中国女性,脂联素与脂重和瘦素一样,也不是BMD的独立预测因子。Pearson’s相关分析表明,在绝经后中国女性,脂联素与血清BAP、血清NTX及NTX/BAP比值呈显著正相关(均为P<0.05),且这种相关性经校正年龄和脂重后依然显著(均为P<0.05)。结论：脂联素是绝经后中国女性BMD的独立预测因子,并与骨转换生化指标呈正相关；而在绝经前中国女性,这种关系并不存在。这提示脂联素对骨量产生负性作用,但脂联素的这一作用受绝经状态影响。第二部分E2对脂联素促人成骨细胞分化作用的影响目的：我们的研究表明,脂联素对BMD的影响与女性绝经状态有关。这提示血循环中的雌激素水平影响了脂联素对骨代谢的作用。本部分研究对雌激素(雌二醇,E2)在脂联素促人成骨细胞(HOB)分化中的影响进行探讨。方法：HOB用α-最小必需培养基(a-MEM)、含10μg/mL脂联素的a-MEM或含10μg/mL脂联素与10-10-10-8M E2的a-MEM分别培养48小时,观察E2不同剂量对脂联素诱导成骨细胞分化的影响；用含10μg/mL脂联素的a-MEM或含10μg/mL脂联素与10-8M E2的a-MEM分别培养12～48小时以观察E2不同作用时间对脂联素诱导成骨细胞分化的影响；另外,在含10μg/mL脂联素与10-8M E2的培养液中分别添加10ng/mLp38激酶激动剂或10-8M雌激素受体拮抗剂后,将细胞培养48小时,以观察E2对脂联素诱导成骨细胞分化的影响是否被p38激酶激动剂和雌激素受体拮抗剂阻断；分别用α-磷酸奈酚法检测成骨细胞ALP、用放射免疫测定法(RIA)测定骨钙素(OC)、用Western Blot检测p38和p-p38。结果：脂联素促进成骨细胞ALP活性、OC分泌和p38激酶磷酸化,E2则抑制成骨细胞ALP活性、OC分泌(均为P<0.01)和p38激酶磷酸化；E2与脂联素联合干预时,ALP活性、OC分泌均随E2浓度升高而降低(均为P<0.01),p38激酶磷酸化水平也随E2浓度升高而下降；而且,联合干预的时间越长,成骨细胞ALP活性与分OC泌量降低得越明显(P<0.05或P<0.01)。在添加p38激酶激动剂或雌激素受体拮抗剂的联合干预组,成骨细胞ALP活性和OC分泌量均较未添加p38激酶激动剂(P<0.05)或雌激素受体拮抗剂组(P<0.01)增加。结论：E2通过抑制MAPK信号通路p38激酶的磷酸化抑制了脂联素的促成骨细胞分化作用。第三部分E2对脂联素调控人成骨细胞OPG和RANKL表达的影响目的：探讨E2对脂联素调控HOB护骨素(OPG)与核因子κB受体活化因子配体(RANKL)表达的影响。方法：HOB用α-MEM、含10μg/mL脂联素或含10μg/mL脂联素与10-10～10-8M E2的a-MEM分别培养48小时,观察E2不同的剂量对脂联素调控成骨细胞OPG和RANKL表达的影响；用含10μg/mL脂联素与10-8M E2的a-MEM分别培养12～48小时以观察E2不同的作用时间对脂联素调控成骨细胞OPG和RANKL表达的影响；另外,在含1 0μg/mL脂联素与10-8M E2的培养液中分别添加10ng/mL p38激酶激动剂或10-8M雌激素受体拮抗剂后,将细胞培养48小时,以观察E2对脂联素调控成骨细胞OPG/RANKL的影响是否被p38激酶激动剂和雌激素受体拮抗剂阻抑；用实时定量PCR (RT-PCR)和酶联免疫分析(ELISA)检测成骨细胞OPG和RANKL mRNA及其蛋白表达。结果：脂联素抑制成骨细胞OPGmRNA表达和蛋白分泌而促进成骨细胞RANKL mRNA表达和蛋白分泌；相反,E2则促进成骨细胞OPGmRNA表达和蛋白分泌而抑制RANKL mRNA表达和蛋白分泌(均为P<0.01)；脂联素与E2共同干预时,成骨细胞OPGmRNA表达和蛋白分泌随E2浓度升高而升高,而RANKLmRNA表达和蛋白分泌则随E2浓度升高而降低(P<0.05或P＜0.01)；而且,联合干预的时间越长,E2对成骨细胞OPG mRNA表达和蛋白分泌的促进以及对RANKL mRNA表达和蛋白分泌的抑制作用越明显；与未添加p38激酶激动剂或雌激素受体拮抗剂的培养细胞相比,添加p38激酶激动剂或雌激素受体拮抗剂的培养细胞OPG mRNA表达和蛋白分泌均下降,而RANKL mRNA表达和蛋白分泌均升高(均为P<0.01)。结论：E2通过MAPK/p38途径阻滞脂联素对成骨细胞OPG/ RANKL表达的调控,从而使成骨细胞OPG表达升高、RANKL表达下降。这可能是绝经后女性BMD与脂联素呈负相关,而绝经前女性BMD与脂联素不相关的机制之一。