以rhaSR启动子为基础的chimeric operon在鱼腥藻Anabaena sp.PCC 7120中表达的初步研究

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本硕士论文分为二部分: 第一部分综述。主要阐述了大肠杆菌鼠李糖操纵子的研究进展以及鼠李糖诱导的启动子在外源基因表达中的应用。 第二部分主要介绍了以rhaSR启动子为基础的chimeric operon在鱼腥藻Anabaena sp.PCC 7120中表达的初步研究。该实验通过PCR等基因重组技术,以RSF1010为原始载体,构建了含rhaSR操纵子表达调控元件、rhaR基因、报告基因gst的嵌合操纵子。通过引物设计,构建了带有PR序列(含rhaSR操纵子表达调控元件及增强SD结合序列的rhaR基因)和PT序列(含rhaSR操纵子表达调控元件及rhaT基因)的二种表达载体pKT-PTR、pKT-PR。首先将pKT-PTR、pKT-PR分别转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在不同培养基条件下,即含鼠李糖与不含鼠李糖的培养基中进行表达,通过紫外分光光度计测定GST蛋白(谷胱甘肽-S-转移酶)的活性,对构建好的表达载体在大肠杆菌中定性分析,确定表达载体构建的正确性以及在蓝藻专用表达载体。RSF1010上的表达活性;然后通过三亲结合的方法将两种表达质粒转入鱼腥藻Anabaena sp.PCC 7120中,在带有抗性的BG-11固体培养基上发现有针尖状的绿色抗性藻落出现,挑取藻克隆将其逐渐放大培养。一段时间后,分别提取两种转基因藻及野生藻中的质粒,并用PCR技术分析,确定表达载体已成功转入蓝藻细胞。最后,在不同条件下用鼠李糖诱导转基因藻中GST蛋白的表达,并通过紫外分光光度计测定GST蛋白的活性。
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