【摘 要】
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我们通过RT-PCR从白血病细胞中培养物中克隆到caspase3基因,将caspase3基因连入克隆载体进一步扩增后,经DNA序列测定,证明所得到的基因序列与文献报道一致,之后将caspase3基
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我们通过RT-PCR从白血病细胞中培养物中克隆到caspase3基因,将caspase3基因连入克隆载体进一步扩增后,经DNA序列测定,证明所得到的基因序列与文献报道一致,之后将caspase3基因插入到pGEX-6p表达载体中,经IPTG诱导使其与谷胱肽转移酶(GST)融合表达,经Western-blotting鉴定和caspase3特异性酶切荧光反应测定活性,我们得到了具有活性的caspase3蛋白酶.同时,我们克隆到铁蛋白重链与轻链的基因并构建了它们的体外翻译载体.GST融合表达提高了caspase3的表达效率,为在酵母双杂产基础上阐明了caspase3与铁蛋白重链、轻链之间的相互作用及进一步研究它们的相互作用在凋亡发生的信号传导过程中的地位奠定了基础.但是在真核细胞中,caspase3与铁蛋白是如何发生作用以及caspase3与其他凋亡基质的相互作用等问题还有待更进一步的研究.
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