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雄性不育突变体是研究植物雄配子发育调控机制的宝贵试材。在前期研究中,本实验室对大白菜雄性不育甲型两用系‘AB01’的不育株和可育株花蕾分别进行转录组测序,鉴别出系列差异表达基因,其中Bra036581和Bra040503在可育株花蕾正常表达,而在不育株花蕾中无表达信号,暗示以上2个基因在大白菜雄蕊发育中可能行使一定的功能。本文进一步克隆了Bra036581和Bra040503的全长序列,明确其表达模式,为后期功能鉴定奠定基础。主要研究结果如下:1.克隆了Bra036581和Bra040503的全长DNA和cDNA序列。序列研究发现,Bra036581和Bra040503功能未知。Bra036581无内含子,CDS全长237bp,所翻译蛋白含有78个氨基酸,预测为分泌蛋白,蛋白质相对质量8.27KD,等电点为7.45,信号肽酶切位点位于第24个氨基酸处;Bra040503同样不包含内含子,CDS全长384bp,编码蛋白含有128个氨基酸,预测为分泌蛋白,蛋白质相对质量14.31KD,等电点为9.70,信号肽酶切位点位于第23个氨基酸处。2.选取‘AB01’不育株和可育株的不同组织和花器官,提取各自的RNA进行荧光定量分析,发现以上2个基因只在可育株中表达,且在花器官中表达量最高,特别是花药的表达量,而根,茎,叶及其他花器官表达量极低甚至不表达。3.克隆了Bra036581和Bra040503的启动子,分别构建表达载体通过蘸花法转入拟南芥,通过潮霉素筛选和PCR鉴定,各得到阳性苗48株和56株。对各组织进行GUS染色,发现以上两个启动子驱动GUS只在花药中特异性表达。4.分别构建了Bra036581、Bra040503和GFP的融合表达载体,连同红色荧光核蛋白载体RFP-AHL22一起转入烟草细胞中,在激光共聚焦显微镜观察基因表达产物的亚细胞定位情况。结果显示,基因Bra036581在质膜和细胞核上都有表达产物,基因Bra040503只在细胞核上有表达产物。